組織培養技術培育的不帶草莓斑駁病毒(S.oV)、草莓輕型黃邊病毒(SMYEV)、革莓鑲脈病毒(SVBV)和草莓皺縮病毒(SCrV)的草莓脫毒苗的生產。
草莓脫毒苗經過組織培養脫毒處理或直接引進，經檢測後確認不帶指定病毒的種苗。
脫毒組培瓶苗的培育技術
1優良品種選擇--選擇適宜當地栽培的高產優質品種進行脫毒。
2草莓脫毒的主要方法
*莖尖組織培養法:
1外植體選擇--選擇無病蟲、品種純正的健壯植株，切取帶生長點的自走莖段 3cm ～4cm ，用流水沖洗乾淨。2莖尖剝離--將表面清洗過的材料置於超淨工作台上，用70%酒精表面消毒30s，再用0.1%昇汞消毒5min～10min，並不斷攪動：然後用無菌水沖洗3次～5次，去鱗片，在解剖鏡下用針挑取0.2mm ～0.3mm 的莖尖，立即接種於莖尖分化培養基中。3培養條件--草莓莖尖培養所需要溫度為23℃ ～28℃ ，光照強度為1000Lx～3000Lx，每天光照12h～16h。誘導培養2～3個月，待叢生芽形成後轉入增殖培養基。4組織培養快繁--將在莖尖分化培養基礎上誘導分化的第一代叢生芽進行病毒檢測，合格的試管苗在增殖培養基上增殖，增殖培養每20d～30d繼代一次(總繼代次數不超過10代)，選2cm ～3cm 的小苗轉入生根培養基，經過20d～30d生根培養，形成完整植株的組培苗出售給生個人；不合格的試管苗全部銷毀。
*花藥組織培養法:
1外植體選擇--摘取花萼未張開花粉母細胞處於單核期的花蕾，放入4℃ 冰箱中預處理1d～2d。2培養過程--取預處理過的花蕾，在無菌條件下用70%酒精浸泡20s，再用0.1%昇汞消毒5min～8min，並不斷攪動，無菌水沖洗3次～5次，然後在無菌條件下中去除花萼、花託等，用鑷子挾取黃色花藥立即接種於癒傷組織誘導培養基中。3培養條件--癒傷組織培養進行暗培養，培養溫度為23℃ ～28℃ 。*組織培養快繁--癒傷組織誘導培養2～3個月後，將0.2cm 大小的癒傷組織轉入分化培養基中誘導叢芽分化，待分化成茁後，進行病毒檢測，對合格的試管苗進行增殖，增殖培養每20d/30d繼代一次(總繼代次數不超過 lO代)，選2cm ～3cm 的小苗轉入生根培養基，經過20d～30d生根培養，形成完整植株的組培苗出售給生產單位或個人；不合格的試管苗全部銷毀。*隔離快繁培育技術--隔離快繁培育技術包括脫毒原原種苗繁殖、脫毒原種苗繁殖和脫毒生產用苗繁殖。1脫毒原原種苗繁殖--經過病毒檢測的脫毒組培苗移栽成活的植株為脫毒原原種苗。脫毒原原種苗每年應進行一次病毒檢測，發現問題即汰除。2脫毒原種苗繁殖--由脫毒原原種苗定植於無土壤線蟲、無革莓病源和防蟲隔離區內，分株繁殖的第一代植株為脫毒原種苗。脫毒原種苗接受病毒檢測機構的定期病毒檢測，一旦發現問題立即更換。3脫毒生產用苗繁殖--由脫毒原種苗定植於無土壤線蟲、無草莓病源和防蟲隔離區內，分株繁殖後代為脫毒生產用苗。脫毒生產用苗接受病毒檢驗機構的定期病毒檢測，一旦發現問題立即更換。脫毒生產用苗直接提供給生產個人。病毒檢測*病毒種類--在危害草莓的病毒種類主要有四種，分別為草莓斑駁病毒(SMoV)、草莓輕型黃邊病毒(SMYEV)、草莓鑲脈病毒(SVBV)和草莓皺縮病毒(SCrV)。
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大果型四季草莓
一、培育過程及品種特性
目前生產上推廣的草莓品種，都是1年結1次果，這是因為草莓品種大多有一個春化階段，都要經過一段時間5℃ 以下的低溫階段，才能打破休眠，正常開花結果。在我國北方和中部地區，一般草莓品種均能順利地通過春化階段，正常開花結果。 但是在我國南方地區，尤其在海南島、廣東、福建和廣西南部地區，一些品種就難以順利通過春化階段。因此，大大限制了在生產上的推廣，只能從北方 地區運送已經通過春化階段的草莓大苗在南方栽培或者採用人工室內低溫處理 一段時間，再移植到室外栽培。 這樣做不但費工費事，而且成本較高，不宜在生產上大面積推廣應用。所以，南方的草莓價格居高不下。前幾年我國也從國外引進了四季草莓，但是 由於果子太小，產量很抵而沒有推廣價值。 針對上述問題，筆者從1992年開始， 應用植物組織培養技術進行了人工誘導變異，選育四季草莓品種的工作。經過3年的努力，從美國草莓品種中成功選育出一個大果型四季草莓新品種定名為冬花。 為了充分發揮出該品種的優良性狀，保持大果特徵和較高的產量，筆者採用中國醫科大學生物技術教研室的草莓熱處理分生組織培養脫病毒技術，獲得了無病毒苗，並分期分批地提供給各地生產示範。該品種已經過連續4年試種示範，表現出無休眠期（無春化階段）、果實大、味甜、產量高，在南京地區露地栽培條件下，9月份栽植，11月底第1次開花結果。只要採取適當的保溫措施，元旦、春節期間均能採收果實。 次年4月份第2次開花結果，在草莓正常結果期採收。該品種果實大，最大可達50克 ，似雞蛋大小，產量22500公斤／公頃以上。 在北方地區，夏天氣溫低於30℃ 亦能照常開花結果。 總之，只要草莓長到7——8片葉，生長達100天左右，就能升花結果。 這樣可以通過調節栽培技術，有效地調節生長速度和發育階段，達到全年分期分批開花結果，均勻地供應市場需求，取得高的經濟效益。近幾年米，不少果農南下海南島，利用冬季溫暖的氣候條件，生產草莓果品供應北方市場，這一優良四季草莓品種可作為首選的理想品種。
二、高產栽培技術
1、採用脫毒苗是高產栽培的根本
草莓是無性繁殖作物，病毒病比較普遍，並逐年加重，成為草莓高產的主要障礙，而且目前還沒有藥劑可以防治。因此歐美國家目前均已實現草莓生產脫毒化。 我國從國外剛引進的優良品種均是脫毒苗，但是在生產上應用2－3年後，由於病毒感染，果實愈來愈小，產量大幅度下降。 對於冬花品種，尤其在南方地區推廣後，由於當地氣候比較溫熱，病毒病的產生和傳播較快，感染病毒病的速度會比北方更迅速，因此採用脫病毒苗將是高產栽培的根本。為此，筆者進行了改良熱處理分生組織脫病毒工作，成功地獲得了四季草莓冬花和其他10個大果型草莓優良品種的無病毒苗。 脫毒效果達到100％，多點生產對比試驗結果表明：脫毒苗果實明顯增大，最大達50—— 80克，而且結果期長，無畸形果，植株生長快，長勢旺，莖葉粗壯，增產效果十分明顯，一般可比同品種未脫病毒苗增產50％以上，結合高產栽培技術，產量可達到30噸／公頃，經濟效益可達9萬元。
2、實現良種良法是高產栽培的關鍵
對於冬花品種，在生產上可以採用以下3種草莓生產栽培技術。
①塑料大棚促成栽培方式。為了充分發揮冬花無休眠期、早熟的優良特性，提高革莓上市售價，最好能投資興建塑料大棚，利用三膜（地膜、拱棚膜和大棚膜）及輔助加溫方法來生產草莓。 草莓在冬季或早春上市，由於售價高，經濟效益也高。這種生產方式成本投資大，一定要慎重選擇無休眠期或春性品種。 例如冬花、豐香、明寶、甜雜、94——3及寶交早生等為宜。冬花是無休眠期的大果型四季草莓，尤其適合於大棚促成栽培或半促成栽培，一般在9月份移栽後，11月就能開花， 12月——翌年1月份就能結果上市，結果期最早。 1998年在進行塑料大棚促成栽培的品種試驗中，冬花開花結果最早，其次分別是明寶、豐香、94——3、寶交早生和甜雜。 只要塑料大繃內溫度不低於10℃ ，濕度控制不要太高，從11——4月份可以連續結果6個月，源源不斷上市，產生很高的經濟效益。 此外適時扣棚也十分重要。以保證在花芽生長發育良好的基礎上促進早發早結果。 一般在11－12月份（華北、東北10月底、華中、華東ll月份，華南12月份）為宜。 過早或過遲扣棚均將影響產量。
②簡易小拱棚半促成栽培方式。小拱棚半促成栽培具有投資少，收益大，方法簡便，技術易掌握等優點，在經濟條件有限的地區，可以大力提倡，積極推廣。 這種生產方式是採用二膜（地膜、拱棚膜）保溫措施，可以使冬花2次結果。 在9月份移栽後，立即加強肥水管理，促進盡快生長發育，然後於10月份氣溫降到15℃ 以下時採用二膜（地膜、拱棚膜）保溫， ll月份就能開始結果， ll月底－12月份上市，翌年1－2月份由於二膜保溫較差，溫度太低不能繼續開花結果，可以加強肥水管理，讓草莓積累養分，安全過冬。 到了春天3－4月份冬花又可以第2次開花結果，4－5月份上市，比正常草莓上市提前了20——30天，售價也較高，同樣可以取得較高的經濟效益。這種1年2次結果的栽培方式只有冬花品種才能實現。 其他品種豐香、明寶、94－3、寶交早生、早紅光、安娜、佛州、女峰和碩豐等也可以採用半促成栽培，但是只能在春天3——4月份提前開花結果。
③正常季節的大面積栽培生產方式。這是目前我國農村草莓生產的主要方式，即選擇水肥條件較好的土地大面積成片種植，正常季節採收，每年5月份上市，供內銷或出口。這種栽培方式成本低，面積大，農民容易掌握。 這種栽培方式直選用產量高、適應性廣、果型大、耐運輸抗病性強的品種。 而冬花由於早熟、果子大、產量高是l個理想的品種。 當然其他大果型脫毒草莓也可以採用。 例如豐香、明寶、94－3、寶交早生、早紅光、安娜、佛州、女峰和碩豐等。 採用這種栽培方式，不能夠充分發揮冬花的優良種性。
3、栽培壯苗，適時移栽
有了良種必須要良法，在採用冬花脫毒苗後應配套採用優良的栽培育苗技術，才能取得高效益。脫毒苗是試管小苗比較嬌嫩，難以在生產上直接應用，必須經過脫毒茁苗床階段的培育。應建立脫毒原種苗繁殖育苗基地，把試管小苗培育成原種大苗，並繁殖出較多數量，提供生產上應用。為了培育壯苗，應選用肥力水平高。 灌排條件好的抄壤土做成1米 寬小畦，稀植（7500－15000株／公頃），同時為了防止病毒感染，採用網罩隔離。 育苗中及時摘除花蕾，只繁苗不結果，經過半年至l年就可繁殖出批量原種苗，供較大面積引種示範和生產。 同樣，果農在引進脫毒原種苗以後，生產中也應該採取專門的培育壯苗措施，即結果後及時清除雜草，鏟去弱株僅留l／5苗繁殖種苗（為脫毒一代苗），多餘的苗可帶土移栽到其他田塊，達到多繁殖種苗之目的。繁殖中及時追肥，以氮、磷、鉀複合肥及農家肥為好，採用這一繁苗技術一般可自繁出50倍優質種苗，供第2年更大面積生產或出售。 產生更高的效益。 脫毒原種苗在生產上應用3年後，即3代苗以後應自然淘汰。 因為逐年累積性感染病毒，這時病毒感染程度已達到60％，在生產上脫毒的優勢已減弱，在一定程度上影響果實大小和產量。草莓移栽時間主要根據當地氣候條件而定，在我國氣候條件下東北、華北以9月份為宜，華中、華東大棚促成栽培以9月下旬、露地栽培以10月份為宜，華南以11月份為宜，總的原則是早移栽早成活，對草莓生長發育結果有利，但移栽過早則會因氣溫高成活率較低得不償失。
4、採用雙行高壟栽培方式
根據日本草莓60噸／公傾的高產栽培模式以及筆者的實踐體會，採用雙行高壟栽培方法具有追肥方便，果實潔淨，便於田間管理，果實產量高等優點，值得推廣應用。具體做法是：每壟寬50厘米，溝深30厘米，壟上栽雙行，行距25厘米，密度9萬－12萬株／公頃，上等肥力土地可略稀些，中等肥力土地可略密些。
5、及時追肥保證冬前早發、冬後促果所需的養分
草莓是耐肥高產作物，為了保證生長發育開花結果所需的養分，除了選用肥水條件好的土地施足肥外，及時追肥十分重要，迫肥可分3次進行。 第1次於移栽成活後10天，用複合肥225公斤／公頃或人糞尿追肥促其紮根早發，“年前有壯苗，年後有大果”；第2次於次年春天或大棚覆蓋後，穴施複合肥300公斤／公頃，以促使花芽生長發育；第3次於開花期前後施促果肥，施複合肥375公斤／公頃或人糞尿，促進花果發育，促成大果。
6、其他技術措施
在以上5大技術關鍵實施的基礎上可採用以下有關技術措施以進一步提高產量。 開花期如產生匍匐莖應及時摘除，減少養分消耗；如花果太多，應及時疏果除去小分枝果及弱小果，一般每株留果10－15個以保證大果生長發育所需養分供應；在扣棚條件下應注意放蜂或人工扶助授粉以提高產量。此外，結果期用質量分數為0．002的磷酸二氫鉀或質量分數為0．02的過磷酸鈣液葉面噴霧根外追肥，也能收到增產增收的效果。
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一、草莓的形態特徵和生物學特性
草莓（Fragaria spp．）為重要的漿果植物，?栽培分佈很廣，其總產量在漿果類中僅次於葡萄，居世界第二位。草莓果實柔軟多汁，含豐富的糖、酸、礦物質，維生素等。?草莓可鮮食，也可加工成果醬，果酒等。其顏色鮮豔，是良好的配餐食品。
草莓繁殖容易，結果早，收效快。尤其是近年的促成栽培，利用塑料大棚、日光溫室，使草莓的成熟期大大縮短，從每年的11月份到次年的6月份，都有新鮮草莓上市，填補了水果的淡季市場。
（1）形態特徵草莓屬多年生草本植物，?植株矮小，呈半平臥叢狀生長，根係為鬚根系，在土壤中分佈較淺。草莓的莖呈短縮狀，分地上和地下部分，地上短縮莖節間極短，節密集，其上密集輪生葉片，葉腋部位著生腋芽。地下短縮莖為多年生，?是貯存營養物質的器官，也可發育成不定根。匍匐莖是草莓的特殊地上莖，?是其營養繁殖器官，莖細，節間長，一般座果後期發生。?葉屬於基生三出複葉，呈螺旋狀排列，在當年生新莖上總葉柄部與新莖連接部分，有兩片托葉頂端膨大，圓錐形且肉質化。離生雄蕊20～35枚。雌蕊離生，呈螺旋狀排列在花托上，數目從60～600不等。?花序為二歧聚繖花序至多歧聚繖花序。果實為假果，主要是花托膨 大肉質化形成，瘦果以聚合果形式生於花托上。果實成熟時果肉紅色，粉紅色或白色。
（2）生物學特性草莓根系在土壤溫度達到2℃ 時開始活動，在10℃ 時開始形成新根，根系生長的最適溫度為15～20℃ ，秋季溫度降低到7～8℃ 時生長減弱。春季氣溫達5℃ 時植株開始萌芽，莖葉開始生長。草莓是喜光植物，但又比較耐蔭。光照充足，植物生長旺盛，葉片顏色深，花芽發育好，能獲得較高的產量。相反光照不良，植株生長勢弱，葉柄及花序柄細。葉片色淺，花朵小，果實小，著色不良。草莓的根系分佈較淺，加上植株矮小，而葉片則較大，因此蒸發量大。在整個生長季節，葉片幾乎都在不斷地進行老葉死亡、新葉發生的過程，葉片更新頻繁。這些特點，決定了草莓對水分要求較高。但在不同的生長發育時期，對水分的要求不同。開花期土壤的含水量應不低於最大田間持水量的70%。果實膨大及成熟期土壤含水量應不低於80%，而秋季9、10月份，土壤持水量達60%即可，草莓不耐澇，要求土壤既有充足的水分供應，又要有良好的通氣條件。草莓對土壤適應性強，在各種土壤上都能生長。但由於是淺根性作物，要求肥沃、疏鬆、透水、通氣的中性、微酸性或微鹼性土壤。
二、栽培方法(Cultivation Methods)
在自然條件下，草莓用匍匐莖分株法繁殖,這種方法繁殖係數高，保持了母本的優良性狀。在繁殖圃設1m 寬行距，50～60cm株距定植，從5月到9月均可繁殖。圃內保證肥水供應，保持土壤濕潤、疏鬆，減少結果量。?匍匐莖發生後，將其向母株四周拉開，排列均勻，並在偶數節上壓土促髮根系，每條匍匐莖上可形成3～5個壯實的子幼苗，待莖苗長到3～ 4片葉時可以移出，作為定植苗用。移出時每株小苗靠母株一側的匍匐莖留2cm長剪斷，另一側齊根剪斷。起出的苗可進行假植，假植寬度以15× 15c m為宜，假植深度以根和葉柄分界線埋入土壤1cm為宜，假植後要做好管理工作。
三、草莓的脫毒苗培養(Culture of Disinfected Seedling )
1．熱處理脫毒
將草莓植株在40～41℃ 溫度下處理4～6週，然後取微莖尖培養。
2．微莖尖脫毒
（1）初代培養取草莓生長健壯的母株或匍匐莖上的頂芽，用自來水流水沖冼2～4h，然後剝去外層葉片，在無菌條件下，用0.5%次氯酸鈉溶液表面消毒5min，並不停地攪動促進藥液的滲透。在無菌條件和解剖顯微鏡下剝取莖尖分生組織，以帶有1個葉原基的莖尖為好。0.2mm的莖尖無病毒率可達到100%，但接種後的成活率下降，並延長培養時間。莖尖分離後，迅速 接入培養基MS+BA0.25+NAA0.25或White+IAA0.1中。培養條件為22～25℃ ，日照16～18h/d，光強3000Lx。經2～3個月的培養，可生長分化出芽叢，一般每簇芽叢含20～30個小芽為適。注意在低溫和短日照下，莖尖有可能進入休眠，所以較高的溫度和充足的光照時間必須保證。
（2）繼代培養把芽叢割成芽叢小塊，轉入MS培養基中，令其長大，以利分株，待苗長大到1～2cm時，可將芽叢小塊分成單株，再轉入前述的分化培養基中，又會重複上述過程，達到擴大繁殖的目的。
（3）生根培養在培養基中加入NAA 1m g/L或IBA 1m g/L，?使髮根整齊，由於草莓地下部分生長加快，髮根力較強，也可將具有兩片以上正常葉的新莖從試管中取出進行試管外生根。
（4）馴化用鑷子把草莓苗從試管瓶中取出，洗掉根系附帶的瓊脂培養基。?事先備好8× 8c m或6× 6c m的塑料營養缽，內裝等量的腐殖土和河砂。栽前壓實，澆透水，用竹籤在缽中央打一小孔，將試管苗插入其中，壓實苗基部周圍基質，栽後輕澆薄水，以利幼苗基部和基質密合。
栽後的試管苗要培養在濕度較大的空間內，?一般加設小拱棚保濕，並經常澆水，以增加棚內濕度，以見到塑料薄膜內表面分佈均勻的小水珠為宜。?約過7～10d後。當檢查有一定的根系生出，可逐漸降低濕度和土壤含水量，進入正常幼苗的生長發育管理階段。
四、花藥培養(Pollen Culture)
花藥培養操作簡單，?因經癒傷組織途徑，再分化得到的即為無病毒苗，所以可免去病毒鑑定工作。
1．取材與培養
取花粉發育單核期的花蕾，置於潔淨培養皿中，內放一層濾紙，滴蒸餾水數滴保濕。將處理放入3～4℃ 冰箱中低溫保存3～4d。經預處理的花蕾先在70%酒精中浸泡半分鐘，取出放入新配製的飽和漂白粉上清液中消毒10min，用無菌水沖冼3次。然後在超淨工作台上剝取花藥，立即接種。花粉發育時期可採用醋酸洋紅壓片簽定，培養基為MS+2.4－D 0.4 +IAA2。去分化階段培養條件為24～26℃ ，10h/d, 1500L x，20d後可產生乳白色的癒傷組織。
2．植株分化
將誘導出的花藥癒傷組織轉移至1/ 2 M S基本培養基中，添加GA 0.5，BA 0.5和三十烷醇4mg/L。癒傷組織經培養後很快轉綠，以後微帶淡紫紅色，?15d後在表面分化出半球形小突起，轉為綠色。20天后分化出幼葉、幼莖，並有不少突起物，以後陸續分化出新梢。
五、草莓無病毒苗的鑑定(Identification of Disinfected Seedling)
草莓花藥培養得到的為無病毒苗，?而用生長點培養得到的植株，則必須經過病毒鑑定，確定其不帶病毒，才可以大量繁殖，用於生產。
1．草莓病毒的種類
草莓病毒主要有四種，為斑駁病毒，皺葉病毒，脈結病毒和輕型黃邊病毒。斑駁病毒在EMC指示植物上表現不整齊的黃色小斑點；皺葉病毒在指示植物UC—1上產生不整齊的小斑點，以及不整齊的葉脈，葉柄暗褐色；脈結病毒在指示植物EMC上表現小葉向後反轉成風車狀，尖端捲曲，葉脈成帶狀褪綠；輕型黃邊病毒在EMC指示植物產生紅葉，數日即枯。
2．草莓病毒的鑑定方法
因草莓的病毒在通過汁液接種時不感染，所以通常採用小葉嫁接法來進行鑑定。
首先從被鑑定的草莓上採集長成不久的新葉，除去兩邊的小葉，中央的小葉帶1～1.5cm的葉柄，?把它削成楔形作接穗。而指示植物則除去中間的小葉，在葉柄的中央用刀切入1～1.5cm，再插入接穗，用線把接合部位包紮好。為了防止乾燥，在接合部位塗上少量的凡士林。?為保證成活，在二週內，可罩上塑料袋，置於半見光的場所。約經兩週時間，撤去塑料袋。若帶有病毒，嫁接後1～2個月，在新展開的葉、匍匐莖或老葉上會出現病症。
六、草莓無病毒苗的繁殖和利用(Propagation and Utilization)
1．防止蚜蟲的危害
草莓無病毒苗的繁殖重要的是要防止無病毒苗的再度污染。?由於草莓病毒主要是蚜蟲傳播的，?所以要搞好防蚜蟲工作。傳播草莓病毒的主要有草莓莖蚜、桃蚜和棉蚜。其中分佈最廣泛的是草莓莖蚜，莖蚜的身體著生有釘狀的毛，可以寄生在寄主的全株各個部位上。草莓病毒通過蚜蟲吸吮汁液而得到傳播，短時間即可完成。防治時可使用馬拉松乳劑，氧化樂果乳劑等接觸殺蟲劑，防治期在5～6月和9～10月，特別是9～10月一次，可防止蚜蟲的越冬。
為保證種苗的無病毒，在原種種苗生產階段，應在隔離網室中進行。傳播草莓病毒的蚜蟲較小，可以通過大於1mm網眼，故應採用0.4～0.5mm大小的規格，其中以300號防蟲網為好。
2．繁殖程序及提高繁殖率的措施
草莓無毒苗的繁殖程序可分五步，包括病毒鑑定生產出無毒苗、原種種苗培養、原種種苗繁殖、良種種苗繁殖，生產用苗繁殖和栽培苗繁殖，前四步在隔離室中進行，後一步露地進行。為提高無病毒母株的繁殖株數可採用赤黴素處理和摘蕾的方法。赤黴素處理用5ppm的濃度，每株5ml，在5月上旬和6月上旬分兩次進行。摘蕾可減輕母株的營養負擔，促使匍匐莖的大量發生，田間地每一株可繁殖150～200株。
3．生產管理工作
母株必須保證每株有大於3.3m2 的營養面積。再是注意匍匐莖排列位置，不要交錯重疊，不利採苗，採苗也要適時進行。無論秋季或春季種植，?繁殖床必須要進行土壤消毒，小面積可用蒸氣劑料混合消毒，可防治草莓萎縮病、根腐病、萎凋病等的發生。
隔離繁殖圃通常施緩效性肥料，每公畝用3t肥；為促使匍匐莖發生，要經常灌水。
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