TTCKMC 台灣蔡大川 六美生技 中草藥 組培工廠 蝴蝶蘭組培教學(From1984).全年生產 管理 瓶苗 幼苗 專門外銷!!!

植物病毒脫除技術與原理

上海必優生物科技有限公司概況

連絡人: 朱小姐

病毒檢測技術在種苗產業之應用!!!.......種苗改良繁殖場

Real-time PCR 的精確掌握染病植株的病重程度!!!

ELISA檢測設備 !!!TTC

ELISA( enzyme-linked immunosorbent assay )酵素連結免疫吸附法!!!

自然界有許多專一性的配對分子，例如：兩股 DNA 分子間的鹼基配對、酵素與其基質間的結合與催化、各種荷爾蒙與其受體、抗原與其抗體的結合等。其中，抗原與抗體的專一性配對，可用人為的設計與免疫操作，在實驗室中取得專一性的抗體；這是目前極少數可用人工產生專一性分子探針的方法之一。抗體與抗原之間的高度專一性，一直吸引著研究學者的注意力；對於抗原抗體間的專一結合關係，免疫學家自百年前已從免疫沈澱法清楚觀察，後來又發展出雙向免疫擴散 (double diffusion)，以及酵素免疫分析法 (enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)，成為免疫化學的標準工具。這些免疫工具與方法，到現在都還應用在基礎研究，或產業界的各種檢驗及醫療用途上。ELISA是在1971年首次由Engvall和Perlman所介紹。不論是測抗原或抗體都有很高的敏感性及專一性，且使用設備相較之下少了許多。固相吸附准許unbound reagents快速且完全地清洗。是一種安全又穩定的方法。

憑藉超過20年的經驗，在植物組織培養技術，上海鼎漢生物科技有限公司（“鼎漢”）是亞洲領先的組織文化的傳播者之一。原名台灣華誼蘭花花園，鼎漢是總部設在中國的全面的生產設施，在上海，無錫，採用組織培養在育種和生物技術應用，傳播和大規模生產的蝴蝶蘭在中國的行業領導者。深圳市鼎漢擁有大棚面積達52,000平方米，10,000級（FS 209E）在8600萬平方米的組織培養實驗室。嚴格的質量控制協議是地方所有的蝴蝶蘭的產品和售後服務。鼎漢工作總無病毒生產鏈，實行嚴格堅持污染預防控制措施，以及在組織培養過程中應用廣泛的ELISA病毒測試程序。鼎漢保持嚴謹的政策，確保只有健康的植物被交付給客戶

日前，上海鼎漢生物科技有限公司向國內外蝴蝶蘭種植者供應無　　ORSV（Odontoglossumringspotvirus，齒蘭環斑病毒）和CyMV（Cymbidiummosaicvirus，建蘭花葉病毒）兩種病毒的蝴蝶蘭種苗，引起業界關注。公司副總經理張友強表示，目前，歐洲國家的部分企業從我國引進蝴蝶蘭種苗時，已明確要求不能攜帶ORSV和CyMV這兩種病毒，隨著種苗市場競爭的加劇，對無ORSV和CyMV病毒種苗的需求，將是國內外蝴蝶蘭產業發展的趨勢。　　據瞭解，ORSV和CyMV是目前在蘭科植物中分佈最普遍、影響最顯著的兩種病毒。花之星實業有限公司總經理李昆沛介紹，根據目前的檢測結果發現，蝴蝶蘭可能攜帶的病毒共有24種，其中會對蝴蝶蘭生長和開花產生影響的主要就是ORSV和　　CyMV。當蝴蝶蘭植株感染單種病毒時，病症表現不明顯，但如果同時感染這兩種病毒，就可能出現“複合感染”的病症，具體表現為先期葉片出現病斑，到開花時，植株出現花朵畸形、花瓣缺失、小花緊湊地簇生於花梗同一部位等症狀。但攜帶這兩種病毒的植株並不是必然會表現出病症的，而是受生長環境的影響，當出現溫室通風不良或持續高溫高濕時，才會引發病情，而且不同品種的發病程度不同。　　目前，蝴蝶蘭種苗無論是供應國內市場還是出口，大多攜帶ORSV和CyMV兩種病毒。據今日景藝生物科技有限公司總經理陳昌龍估計，當前祖國大陸生產者使用的蝴蝶蘭種苗幾乎90％以上攜帶這兩種病毒，臺灣地區生產的蝴蝶蘭種苗中，這兩種病毒的攜帶率也在70％左右。現在，歐洲一些蝴蝶蘭種植企業對進口的種苗開始要求不攜帶ORSV和CyMV病毒，他認為主要原因在於：一方面是考慮到這兩種病毒對歐洲當地其他作物的交叉感染，因為可以被　　ORSV和CyMV感染的蘭科植物達30個屬以上，幾乎涵蓋所有經濟化栽培生產的蘭花品種，其中，CyMV病毒不僅會感染石斛蘭、卡特蘭、大花蕙蘭等蘭科植物，也感染水仙等球根花卉；另一方面是為了減少蝴蝶蘭在催花階段，遇到環境控制不當，可能引起這兩種病毒病發帶來的經濟損失。迄今，在實際的蝴蝶蘭大面積生產中，由病毒造成的成品蝴蝶蘭不合格率不超過20％。當種苗出口歐洲時，部分企業要求在正常的栽培環境下，蝴蝶蘭的出花不合格率低於3％，要滿足這個要求，必須供應不攜帶　　ORSV和CyMV病毒的種苗。李昆沛認為，歐洲國家目前還沒有全面限制引進攜帶ORSV和CyMV這兩種病毒的蝴蝶蘭種苗，是因為國際市場蝴蝶蘭種苗供應相對緊缺，無ORSV和　　CyMV病毒的種苗供應量還遠遠不能滿足市場的需求。上海歐香生物科技有限公司經理孫百秋也表示，雖然目前歐洲市場對攜帶ORSV和　　CyMV病毒的種苗還有需求，但隨著種苗供應量的擴大，市場競爭日益激烈，接下來幾年，歐洲市場對無　　ORSV和CyMV病毒種苗的需求會較快上升。　　據介紹，要實現大批量無ORSV和CyMV病毒的蝴蝶蘭種苗供應，需要將種苗生產企業現有的帶毒材料，通過層層檢測篩選，逐步轉變，這是一個緩慢的過程。在蝴蝶蘭種苗的組培生產過程中，一般有3個步驟是必須進行病毒檢測的。第一步，母株必須檢測；第二步，在切花梗培養分生苗時也必須進行檢測，但每一株都檢測需要的人工和時間投入非常大，通常只進行抽樣檢測；第三步，在組培過程準備出瓶苗時，病毒攜帶株的病症尚處於潛伏狀態，一般也需要進行再次抽樣檢測。單個樣本每檢測一次的設備和藥劑成本在10元至12元，另外還有人工的額外投入，因此，無論是出口還是在國內銷售，不攜帶　　ORSV和CyMV病毒的蝴蝶蘭種苗一般比沒有經過這兩種病毒篩選的種苗貴0.2元至0.4元。　　近年來，有關企業已相繼引進病毒檢測設備和技術。上海鼎漢生物科技有限公司在兩年半前引進2套定性檢測ORSV和CyMV的Elisa病毒檢測設備，開始向生產無ORSV和　　CyMV病毒的種苗轉變，現在，公司已實現70％的蝴蝶蘭種苗不攜帶這兩種病毒。去年，上海歐香生物科技有限公司也開始這方面的工作，並在今年引進了對這兩種病毒定量檢測的　　RT－PCR檢測設備和方法，計畫到2008年，實現大部分品種的種苗不攜帶ORSV和CyMV病毒。今日景藝公司也已經著手生產無ORSV和CyMV病毒的種苗，陳昌龍表示，公司將在未來5年內，實現70％的種苗不攜帶　　ORSV和CyMV病毒。生產無ORSV和CyMV病毒的種苗是產業發展的必然趨勢，這一觀點已被專業的蝴蝶蘭種苗供應商所認可。　　日前，中國檢驗檢疫科學研究院動植物檢疫研究所也已組織起草了《建蘭花葉病毒檢測方法》行業標準，目前正在審核中。該行業標準的出臺，將更好地促進和規範無CyMV病毒蝴蝶蘭種苗的生產。

DNA提取概述  DNA提取分爲三個基本步驟，每個步驟的具體方法可根據樣品種類、影響提取的物質以及後續步驟的不同而有區別。利用研磨或者超聲破碎細胞，並通過加入去污劑以除掉膜脂。加入蛋白酶，醋酸鹽沉澱，或者酚／氯仿抽提，以除掉細胞內的蛋白，如與DNA結合的組蛋白。將DNA在冷乙醇或異丙醇中沉澱，因爲DNA在醇中不可溶而黏在一起，這一步也能除掉鹽分。另外，目前也有利用吸附過柱的方法提取DNA的商業化試劑盒。

DNA的檢測  二苯胺（DPA）指示劑能夠證明DNA的存在。在酸中加熱後，含有去氧糖的DNA水解，2-去氧核糖轉變為ω-羥基菊芋糖醛（ω-hydroxylevulinyl aldehyde），與二苯胺反應，產生藍色的化合物。DNA濃度可以利用分光光度計通過測量溶液在600nm的吸光度來計算。測量DNA純度的方法是測量DNA溶液在260和280nm的吸光度。DNA吸收260nm處的紫外光，而蛋白質吸收280nm處的。一個較純的DNA樣品應該基本不含蛋白質，因此260/280的吸光度比值應該較高。DNA也可以通過內切核酸酶切開後跑膠，與已知濃度的DNA分子量標準（marker或者ladder）對照來測定濃度。

http://loomayorchids.pixnet.net/blog