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馬賽克木瓜
疾病的重要性：
番木瓜環斑病毒，也被稱為環斑病，木瓜產區普遍出現在最重要的疾病之一。它是由番木瓜環斑病毒（PRSV
- 對）屬於馬鈴薯Y病毒，由幾種類的蚜蟲來傳輸，而不是由種子傳播。不被感染的應對措施，還不知道的，只有用抗病品種。在夏威夷被開發的轉基因番木瓜品種有抗病性的。本病可迅速蔓延，造成重大損害，甚至可能破壞一個地區的種植。疾病症狀：最初有一個泛黃的最年輕的葉子，隨後出現了馬賽克，或混在綠化區有黃色輪斑形狀各不相同。可能會發生嚴重的變形病葉，其特徵在於葉片的其餘部分形成鮮明對比的正常綠色參雜黃葉色彩。每個人都應該注意!不要受到了廣大的蟎引起這些症狀-不明的起泡狀斑葉。果實可具有綠色小的同心環的形狀以及有油性斑。更進一步的階段，是有環狀斑可能成為壞死發白細胞。在該地區的莖和葉柄可能會出現不規則的深綠色的顏色外觀和油性斑。措施： - 在果園進行定期檢查（每週），並消除感染的植物（“去雜去劣”）。 - 更新新的苗圃和果園，尤其是如果有馬賽克斑出現。
- 避免在此瓜類（南瓜，冬瓜，西瓜，黃瓜，小黃瓜和其他）設果園，這是病毒的寄主，以及蚜蟲的寄生植物的果園。
- 消除廢棄的果園和植物生產循環結束時，避免連作使病源傳播。官方公報第42號，第104/03/2004）農業部提供的具體立法（在nº0401/03/2002)，立即剷除病株，不遵守將設置處罰條例。 刑法第259條。注意：為了提高效率，應該共同採取控制措施，在該地區的所有生產者參與。 ***技術團隊：，哥斯達黎加 - 研究員Hélcio，理學博士植物病理學/
Incaper的布宜諾斯艾利斯何塞·文圖拉 - 研究員，理學博士植物病理學/
Incaper的里卡多·普拉特斯 - AGR。 MA/ DFA-ES承認：農業專責人員/
DFA-ES的支持和奉獻. ditossanitária製作。-------------------------------------------------------------------------
具抗病性野生種木瓜組織培養保存之研究1黃柄龍2 廖麗貞3 萬雄4摘要野生種木瓜Carica goudotiana 的葉柄培植體在含1.0mg/l NAA、0.5mg/lkinetin 及1.0mg/l GA3 的1/2 MS 培養基上，可經由誘導的癒合組織直接產生體胚，其體胚形成能力約為50﹪；且所長出的根，亦可於此D1 培養基中誘得癒合組織及25﹪的體胚形成，此癒合組織並可於WL (White’s)之固態分化培養基中誘得體胚分化。所得似胚軸組織於添加0.5mg/l IBA 之MS 培養基中，可促進癒合組織及體胚形成。Carica pubescens 經以D1 誘導培養基所得之葉柄癒合組織，其體胚分化能力僅發生於EL4及WL之固態分化培養基中(5～6.7%)。所形成的未萌芽體胚，可在含0.001ppm BA 之EM (embryo mature)培養基中成熟、萌發。萌芽的體胚不需經由任何的誘根處理，即能長成具有健全根系的植株。前言 栽培種木瓜Carica papaya L.，生長快速，為栽植一年內就能收成的半草本多年生果樹，若是不感染任何病害，整個生活期中可連續採收，是為熱帶和亞熱帶的重要經濟性作物。然木瓜輪點病毒(papaya ringspot virus, PRSV)的肆虐，致使現今木瓜需栽培於網室內才能確保品質與產量(1,2)，為目前木瓜最嚴重的病害(24)。同時，木瓜輪點病感病株病徵型會因季節交替、溫度變化而有輕重不同的不穩定表現(7)，造成果實品質低下，失去商品價值。由於PRSV病害無法以藥劑防治，只能以育成抗PRSV 或耐PRSV 品系來解決此病害。目前雖然已可以遺傳工程的方式，利用農桿菌(Agrobacterium)媒介感染，將PRSV 鞘蛋白基因轉移至木瓜擬胚化組織，並成功獲得轉殖植株(5)；不過，木瓜畸葉嵌紋病(papaya leaf-distortion mosaic virus, PLDMV)的發現，似乎有將基因轉殖木瓜擊倒的情形發生(6)，所以問題仍尚未完全解決。目前數種栽培種木瓜中，未發現帶有抗PRSV 的基因者(24)，檢視野生種木瓜如C. cauliflora，C. pubescens，C. goudotiana，C. stipulata，以及C. quercifolia 等則具有極強之PRSV 抗病性(8,14,26)。Mekako 和Nakasone(26)對具有抗PRSV 之野生種木瓜雜交後代的遺傳分析得知，PRSV 的抗性是由單一顯性因子所控制，此結果亦見於其他報告(14,26,28)。所以，利用含有抗木瓜輪點病毒基因的野生種木瓜，經由傳統的雜交育種程序，將此抗性基因轉移至栽培種木瓜，為另一可行的途徑。不過，這些野生種木瓜的栽培，常受氣候影響及颱風為害，且有些不易開花結實，保存上頗為困難。因此，本研究希望應用組織培養技術，建立一理想的繁殖系統，以保存這些極具育種價值之野生種木瓜種原。一、試驗材料：1.野生種木瓜C. goudotiana(Tr. & Pl.)SolmsC. goudotiana 是一種典型的雌雄異株物種；其莖幹直立，沒有分支，顏色呈淡紫色至棕色；植株高度通常為6 至7 呎，若土壤肥沃有時更可長至10 呎以上。葉柄長且呈紫色，葉片通常3 至5 裂。雄花開花較早，花序長，呈圓錐花序；雌花1~4 朵，著生在短花梗上。果實小，外表有時隆起，成熟後轉為黃色；果肉富含纖維質；氣味芳香。種子表面粗糙有突起，每一果實約含50~80 粒種子(31)。當與其他不同物種之木瓜雜交後，容易落果，例如與C. monoica 雜交，僅可以得到少數具有發芽能力的種子(27) 2.野生種木瓜C. pubescens Lenn et KochC. pubescens 具有雌株及兩性株兩種樹型(14,15)；其植株矮小，幹直、大多沒有分支；葉柄短，葉片背面長滿細短的絨毛狀物；植株頂端部位具有白色霉狀斑點，同時也佈滿細毛。其耐寒性較強(25)，具抗PRSV的特性(8,14,26)；與C. papaya 雜交後，C. papaya 的花粉管在6 天之內就可以伸展到母本親的子房中，不像其他野生物種有難以克服子房過小及多室的結構障礙(structural barrier)，故能產生生長勢旺盛的雜種(25)。二、試驗方法：切取野生種木瓜C. goudotiana 、C. pubescens 葉寬約4 公分，葉柄直徑約0.3～0.5 公分，長約2 公分的幼葉為材料。先以70％酒精溶液擦拭表面後，置於含2～3 滴Tween 20 之1％次氯酸鈉(NaOCl)溶液中，利用超音波洗淨器震盪消毒12 分鐘，再以無菌水充分沖洗3 次，每次3 分鐘。將葉柄、葉柄與葉片交接處組織，與葉脈橫切成厚約2 mm 之薄片做為培植體之用。1.癒合組織之誘導培養 將C. goudotiana 與C. pubescens 兩種野生型木瓜之葉柄、葉柄與葉片交接部位組織，及葉脈三種不同部位的培植體，接種於C1、C2 及D1(表1)等誘導癒合組織的固態培養基中，觀察不同物種之木瓜在不同培養基中，不同的培植體，其癒合組織形成情形。另一方面將葉柄培植體經D1 培養基培養形成之癒合組織上所長出的根做為培植體，再接種於原誘導培養基D1 中，研究其形成癒合組織的能力及其分化潛能。在各種試驗組合中，其培植體來源葉柄、葉脈、根段各為15～20 個，葉柄與葉片交接部位組織為2～4 個。另外，將上述所得的癒合組織切成直徑5mm 左右之小塊，再接種於原誘導癒合組織之固態及液態C1，C2，D1 培養基中，黑暗培養，探討經由癒合組織誘導再生癒合組織之可能。2.體胚之分化 將誘導所得之癒合組織接種在固態及液態之原誘導培養基中或含有不同生長調節劑的分化培養基WL 及EL4(表1)中，探討以一個步驟(one-step)直接誘導體胚形成，或經由誘導產生體胚分化的可能性。3.體胚的萌芽與發根 將球狀未萌芽的體胚挑出，接種於萌芽培養基EM 及CC 中(表1)，觀察體胚萌發的情形。並利用不含生長調節劑的MS 培養基，或含有0.5mg/1 IBA 或1.0mg/1 NAA 的發根培養基處理7～10 天，以尋求一理想的發根條件。當根系發育完全，並具有至少二片綠色展開葉時，經5～7 天健化處理，即可出瓶假植，注意保濕，防止失水凋萎，待七、八片完全展開葉後，移植至溫室中。結果 1.癒合組織之誘導培養由C. goudotiana 與C. pubescens 二種野生型木瓜的葉柄、葉柄與葉片交接部位組織、及葉脈三部分培植體在C1 固態培養基中，各培植體皆可誘導癒合組織，大部分的培植體培養2～3 週後，在切口處形成直徑約5～20 mm的癒合組織，其結果如表2 所示。將不同來源的培植體加以比較，其中以葉柄誘導癒合組織的效果最好(分別為71.4%及55.6%)，所誘導的癒合組織體積也較大；其次為葉柄與葉片交接部位組織(約為50%)，其所誘導產生的癒合組織大小和由葉柄誘導產生的具有同樣的體積；葉脈的誘導能力最差，約只有14.3～16.7%的培植體可以在切口處的一端或兩端形成癒合組織，其體積亦只有前者之1/3～1/4 而已。雖然利用C1 固態培養基可以快速誘導產生大量的癒合組織，但質地鬆軟，顏色呈淡黃色至黃色，而且表層容易產生白色的霜狀物，影響其後續的發育。利用C2 固態培養基誘導癒合組織時，其效果明顯地較C1 培養基為差，僅在葉柄及部分葉脈培植體之切口處產生直徑僅約5 mm 的癒合組織；葉柄培植體之癒合組織誘導率約分別為43.8﹪及35.3﹪，而葉脈培植體之誘導率約僅有10～7%(表2)，且所產生的癒合組織與原培植體在培養基上，很快地就褐化，形成一團褐色緻密、堅實的組織團而已。此外，葉柄與葉片交接部位組織，幾乎無法於此C2 培養基上誘得癒合組織，僅見少數的組織膨大。同樣地，其褐化情形亦相當地嚴重。利用D1 固態培養基培養時，其誘導產生癒合組織的能力，遠較C1 培養基為差(表2)，所誘導產生的體積也較小，僅有部分葉柄培植體能夠產生質地緊密，顏色較深略呈鵝黃色之癒合組織，此癒合組織之表層沒有白色霜狀物；以葉柄誘導癒合組織的培養反應，兩不同物種間略有差異，C.goudotiana 為50%，C. pubescens 為30%，顯示C. goudotiana 比C. pubescens較易得到癒合組織(表2)。在C. goudotiana 葉柄培植體中，有時由誘得的癒合組織上長出根，切取此長出的根，截成每段約3～5 mm 大小作為培植體，接種於原誘導培養基D1，約3 週後，60%的根培植體也能形成癒合組織；而C. pubescens 的葉柄癒合組織並不產生根。除了葉柄之外，其餘培植體均不易在D1 誘傷培養基中形成癒合組織，部分培植體僅僅組織膨大，甚至褐化死亡。將上述各部分培植體在C1、C2、D1 培養基中所誘得之癒合組織切成直徑約0.5cm 大小，接種於固態或液態原誘導癒合組織培養基中黑暗培養，期望能使癒合組織增生。其中，液態誘導培養基所表現的效果並不理想，切碎的組織在液態震盪培養下，所有癒合組織均呈鬆散浸潤狀，並且組織也無明顯增大。而在固態誘導培養基方面，除了葉柄、葉脈癒合組織於C2 培養基培養時已呈褐化現象，無法再次誘導癒合組織的再生之外，C. goudotiana 之葉柄、葉柄與葉片交接部位組織、根，及C. pubescens 之葉柄、葉柄與葉片交接部位組織切碎後，於固態原誘導培養基中，均能再次生成直徑約10 mm 大的癒合組織，並且這種癒合組織的誘導再生現象可以持續誘導發生。培養反應如表3 所示。2.體胚之分化 表4 所示，野生種木瓜C. goudotiana 以葉柄為培植體，D1為培養基，所誘導產生的癒合組織，以及由此癒合組織所長出的根，同樣在D1 中誘得的癒合組織，在相同培養基，不經繼代培養約10 週後，可以在癒合組織的表層形成體胚分化(embryogenesis)(圖1A)。將體胚與癒合組織繼代培養於同一種培養基，癒合組織及體胚可繼續產生，約有50%的葉柄癒合組織具體胚分化能力；產生的根再誘導的癒合組織也有25%可以分化成體胚。同時，此二種癒合組織也都能於WL 固態分化培養基中分化；不過此一現象並無法於EL4 分化培養基中發生。另外，在這種具體胚分化能力的癒合組織上亦會長出形狀類似胚軸之組織，將其切下移至添加0.5mg/l IBA 之MS 培養基中，亦可誘導癒合組織及體胚分化，其產生的方式與葉柄培植體於D1 培養基中所產生的方式相似。所形成的體胚包括球型胚、心臟型胚、魚雷型胚、及子葉胚等各種不同發育階段(圖1B)；體胚大小及型態的差異也很大，同樣大小體胚的發育階段並不一致，因此體胚分化的程度無法由其大小判定。而以C. pubescens 為材料時，經由D1 誘導培養基所誘導產生之癒合組織，體胚分化能力較差，而且具有此種分化能力的癒合組織數目也較少，其體胚分化能力只發生於EL4 及WL 之固態分化培養基中，繼代培養6～8 週後，5～6.7%的癒合組織具有分化體胚的能力(圖2A,B)。3.體胚的萌芽與發根前項誘導產生未萌芽的體胚，可在EM萌芽培養基中，促使體胚成熟，並進而萌發(圖1C,圖2C)。然而這種萌芽現象卻無法於CC 培養基中發生，只造成幼嫩體胚體積長大，最後卻褐化死亡。挑出原先於癒合組織上已萌芽的體胚，或利用EM 萌芽培養基所促使萌發的體胚，接種於不含任何生長調節劑的MS 培養基中，2～3 週後，可由胚芽伸出挺立，新葉完全展開及發根(圖2D)；二個月即可長成具根、莖、葉的完整植株，並可移植於試管外(圖1D)。另外，以含IBA 0.5mg/l 或NAA 1.0mg/l 之MS 培養基處理7～10天促進發根，其結果易使發展中的植株產生不正常的外型，也容易使植株基部再生一團癒合組織.....

穩定的質量，不斷的創新
Merck幾十年來一直致力於提供特殊吸附劑，尤其是具有恆定吸附特性的物質，在色譜領域中是世界上首屈一指的大公司之一。Merk是世界上最大的色譜級矽膠和在GMP條件下生產噸級二氧化矽的製造商。良好的生產經驗已通過廣大的顧客和FDA代理商得到了證實。不斷創新和為顧客創造附加價值的動力是Merck策略的重要組成部分。隨著高效分離介質技術的發展（例如：Polyspher PST10, Chromolith）Merck在分離過程科學上又有了重大突破。為了充分利用高效分離介質的特性還需要高性能的色譜柱，這樣才能使在分析過程中建立的分離方法更簡單，更先進。你所需要的製備柱好的特性來源於優質的色譜柱。但你還應該知道各種優質製備柱的使用受到限制，而且費用高。為什麽要受對預裝製備柱中固定相選擇的限制？為什麽費用高？顧客和技術人員的密切合作產生了新型的裝柱機。Merk能向你保證你將使用到真正高質量的高效液相色譜柱，能向你提供快速反映變化的浮動性，能節省你的費用。常規的製備填充方法在壓力和高線形流速條件下使用快速過濾，這種技術會在固定相粒子間產生跨隙效應，對柱的性能有負面效應。研究表明這種不良影響能在填充吸附劑過程中以“拉”代替“推”來被克服。新型的裝柱技術結合了真空吸收和順序式柱床壓縮的特點使填裝更穩定。用普通的水泵產生真空，通過在柱床底端施加低壓把凝膠勻漿由填充池吸入到柱管中。這種方法能準確調節理想的體積和凝膠床高度。在製備過程這種新技術使柱子的幾何測定更簡單。因此分析柱能很容易地直接轉變成製備柱。這種新的裝柱設備可用來填裝內徑為25mm, 50mm, 100mm所有從半製備到製備工廠到製備級的柱子。每個裝柱機都包括柱子、填裝台、連接管等。實際上你所需要的是你個人準備的高質量的製備分離柱。優點：簡單：新型的真空填充技使製備柱的生產簡單化。性能：由於柱床穩定，填充完的柱子能從填裝台上取下並被使用。帶有溫度控制夾套的柱子具有最佳的分離穩定性和性能，重現性極好。多功能：象鍵合的聚合物軟凝膠也能用新型的填充法填充。柱子很容易被抽空，並能用新型吸附劑快速重新裝滿。可按需求定做柱長。快速：能現場快速製備分離柱。經濟：完全控制的凝膠柱床壓縮使柱的壽命更長，整個製備過程更經濟。可使用一個單一的填裝台來填裝具有相同內徑的各種不同的柱子。對50mm和100mm內徑的填裝台選擇經濟型螺絲帽和簡易鏈系統。便於升級的製備色譜Hibar預裝柱（25mm內徑）。如果你需要的製備柱範圍受到限制並且需要一個現場能使用的系統，那麽Hibar預裝柱是理想的。Hibar預裝柱或特別定制的填充柱完全可以隨時使用，在兩個使用標準的1/16”毛細管柱很容易把柱子和任意高效液相色譜系統連接起來。你可以選擇性能可靠的LiChrosorb,
LiChrospher等吸附劑。更重要的原因是Merk所承諾的質量和重現性。在使用分析柱使分離達到最佳化後，所得到的參數能被很容易傳送到內徑為25mm的柱中。此尺寸對毫克級的最終產品分離是粉腸理想的。Hibar預裝柱的優點：性能：是在嚴格控制條件下製造出來的，確保了及好的結果和重現性。多用性：可從眾多吸附劑中選擇Hibar預裝柱。方便：所有的柱子都是準備就緒即可使用的，很容易和任何高效液相色譜系統連接。無問題：分析級吸附劑的研究方法也可直接用到製備級。一整套的解決方案 Merck在色譜研究和應用方面有多年的經驗，並且被看作是全世界HPLC技術的中心。我們是世界上生產矽膠特別是色譜填料的大公司之一，因此Merk可根據顧客要求 ​​提供製備色譜所需的固定相、各種柱子和儀器設備。我們的技術正式您所需要的，我們將給你特別的支持從而證明您選擇Merck的製備HPLC是正確的。對您的好處是不證自明的：減少工作量：解決你特殊的分離問題節約時間：各種色譜分離中應用技術的轉移提高生產率：一整套分離方法和從克到噸級規模製備中適用於小分子順序式分離的儀器。直接升級公式通過方法的線形轉化，分
​​析級分離柱就可以被輕而易舉轉化成半製備柱和製備柱。任何一種製備分離的目標就是在單位時間內得到高產量的樣品。所以柱子經常在超負荷濃度和體積中運行。柱子的最大承載量根據分離問題的複雜性和數量、收率、時間等先決條件。填充和卸載裝柱機根據固定相的物理參數和柱尺寸，來製備一定體積的凝膠勻漿。使用漏斗形的澆口把懸浮的填料注入到與柱子相連的填充管中。需提供真空。在懸浮物被吸入柱管後移開填充管，密封好頂部的柱蓋。然後用柱體積3~5倍的溶劑清洗柱床，同時壓縮幾次，這種特定的柱床壓縮要根據吸附劑類型使用。通過這種方式獲得了快速沉降和均勻的填充柱。現在柱子就備好等待使用了要卸載柱子時需取下頂部的法蘭蓋，通過向上移動水泵活塞填料便被推出，就可以進行下一次的填裝了。固定相可以被保存等以後使用也可以被處理掉。

 
什麼是暗物質？它如何影響宇宙？美國達特茅斯學院的宇宙學家卡德威（Robert
Caldwell）提供解釋如下：翻譯／邱淑慧我們運用重力估計星系團（因重力而束縛在一起的數群星系）的質量，發現與星系團內發光物質的質量並不相符。對於這個懸而未決的現象，暗物質是可能的解釋。這個差異顯示，宇宙中有些物質無法有效發光，所以是看不見的、是「暗」的。要測定物體（例如恆星）的重力質量，可以量測繞其運轉之物體的軌道直徑與速度。而想知道星系中發光物質的質量，則可利用恆星質量、顏色與光度之間的已知關係，由觀測到的星系顏色與發光強度，換算出星系中恆星的總質量。比較質量與光度的關係後發現，星系與星系團的重力質量遠遠超過光度質量。因此，實際存在的物質比我們眼睛所見的還多。其他的跡象還包含了，近來美國航太總署（NASA）所測得的宇宙微波背景輻射（使我們得以一窺早期的宇宙），給了我們更多資訊：暗物質的總質量是一般物質的1~6倍之多。暗物質有可能是什麼呢？許多物理學家與天文學家猜測，這是一種尚未偵測到的粒子。最有可能的暗物質是微中子，這種粒子類似電子，但是質量小得多，而且不帶電荷。然而所有已知型態的微中子，都太輕也太稀少，無法符合理論上對暗物質性質的描述。暗物質如何影響宇宙呢？它必然是宇宙大尺度結構（星系與星系團）的根基。暗物質並不只是解釋宇宙中遙遠物體的性質，它必然也同樣存在於我們的銀河系內。估計銀河系的組成，就能預測出我們的太陽系是沉浸在純淨的暗物質海洋中，密度高達每立方公尺約10⁵個粒子。此外，當地球繞著太陽旋轉時，有時會順著暗物質海洋的海流，有時則是逆著，我們也等於經歷了不同的「暗季節」。

 
一．逆流色譜技術簡介
現代逆流色譜技術起源於上世紀50年代的逆流分溶法（Counter
Current Distribution, CCD），它利用不同物質在所選擇的兩相溶劑中的分配係數不同而通過多次逆流分溶對物質進行分離。它採用數百個分離管進行操作，每一次操作後，上層液體被轉移至盛有新的下層溶劑的分離管中，而往原分離管中加入新的上層溶劑，看起來好似兩相的液體以相反的方向流動，故稱為逆流分溶法。逆流分溶法存在許多缺點，如使用易破碎的玻璃儀器，分離時間長，需要連續稀釋樣品等。但與液相色譜相比，它無需固體作固定相，從而避免了因此而帶來的一系列問題。因此，在CCD基礎上發展起來的逆流色譜（Counter Current
Chromatography, CCC）在採用了與液相色譜相似的連續洗脫、檢測和分佈收集技術後從上世紀70年代開始得到迅速的發展，並在天然和合成化合物的分離純化中發揮了日益重要的作用。上世紀70年代出現的液滴逆流色譜（Droplet Counter Current
Chromatography, DCCC）使流動相形成液滴，通過作為固定相的液柱而達到分離純化的目的。其裝置主要由輸液部分、檢測收集部分和玻璃管液柱部分（300-500根60cm X 1.8mm的玻璃管）組成。由於流動相形成液滴，在細的玻璃管中與液體固定相有效地接觸，摩擦不斷形成新的表面，促進溶質在兩相溶劑中的分配，所以分離效果好，而且不產生乳化現象。對於易氧化的物質，還可用氮氣驅動流動相。採用DCCC分離純化了許多包括中草藥和抗生素在內的天然產物如柴胡皂甙和短桿菌肽,短桿菌酪素和四環素等。液滴逆流色譜解決了操作自動化的問題，但仍存在分離時間長，使用易破碎的玻璃管，分離度還不高等問題。逆流色譜技術的重大突破出現在上世紀80年代，根據被分離混合物的理化特性，選擇二元或多元的兩相溶劑體系，以上相或下相為固定相，將其註滿色譜柱後使色譜柱作特定的高速旋轉運動，並用由此產生的離心力場支撐柱內的液體固定相，然後以另相為流動相，攜帶溶解的混合物由輸入泵推入色譜柱，穿過兩個液相對流的管柱，各組分根據在兩相中的分配係數不同而得到分離。根據離心力場的不同可將現代逆流色譜分為離心分配色譜(Centrifugal Partition Chromatography, CPC)，也稱盤管行星離心色譜(Coil Planet Centrifuge, CPC)和高速逆流色譜(High
Speed

應用領域：
（ 1 ）天然產物已知有效成分的分離純化
（ 2 ）化學合成物質的分離純化
（ 3 ）中藥一類、五類新藥的開發
（ 4 ）中藥指紋圖譜和品質控制研究
（ 5 ）抗生素的分離純化
（ 6 ）天然產物未知有效成分的分離純化（新化合物開發）
（ 7 ）海洋生物活性成分的分離純化
（ 8 ）放射性同位素分離
（ 9 ）多肽和蛋白質等生物大分子分離以及手性分離
高速逆流色譜技術簡介 高速逆流色譜
（ high-speed countercurrent chromatography ， HSCCC ）是 20 世紀 80 年代發展起來的一種連續高效的液—液分配色譜分離技術， 它不用任何固態的支撐物或載體。 它利用兩相溶劑體系在高速旋轉的螺旋管內建立起一種特殊的單向性流體動力學平衡，當其中一相作為固定相，另一相作為流動相，在連續洗脫的過程中能保留大量固定相。
由於不需要固體支撐體，物質的分離依據其在兩相中分配係數的不同而實現，因而避免了因不可逆吸附而引起的樣品損失、失活、變性等，不僅使樣品能夠全部回收，回收的樣品更能反映其本來的特性，特別適合於天然生物活性成分的分離。而且由於被分離物質與液態固定相之間能夠充分接觸，使得樣品的製備量大大提高，是一種理想的製備分離手段。
它相對于傳統的固—液柱色譜技術，具有適用範圍廣、操作靈活、高效、快速、製備量大、費用低等優點。目前 HSCCC 技術正在發展成為一種備受關注的新型分離純化技術，已經廣泛應用於生物醫藥、天然產物、食品和化妝品等領域， 特別在天然產物行業中已被認為是一種有效的新型分離技
術；適合於中小分子類物質的分離純化。 我國是繼美國、日本之後最早開展逆流色譜應用的國家，俄羅斯、法國、英國、瑞士等國也都開展了此項研究。美國 FDA 及世界衛生組織（ WHO ）都引用此項技術作為抗生素成分的分離檢定， 90 年代以來，高速逆流色譜被廣泛地應用于天然藥物成分的分離製備和分析檢定中。 ---------------------------------------任何熟悉液液萃取（使用分液漏斗）和色譜（例如HPLC）技術的人都很容易理解逆流色譜液液萃取的原理(countercurrentchromatography(CCC))

液液萃取
化學家們分離
量的化學物質提供了

簡單的方法，而且使用的溶劑最少。把樣品溶在兩相溶劑系統中，振搖使兩相充分混合，靜置后，兩相重新分層。
些步驟是分離樣品組分的關鍵。這
經典的液液萃取在色譜工作者看來，最大的缺點是它在分離過程中只有一個理論塔板
。（事實上，這種情況下沒什么理論可言。這一個分離塔板數是源自于工業上的分餾。因此，化學工作者要么設計一合適的單步分離方法去適應自己的需要，要么就用
次液液萃取去提高分離度。通常使用
者，因為后者太麻煩了。（盡管多次液液萃取經常用到，但溶劑系統在不同的提取中通常要改變，以便提高效率。）改善分液漏斗的嘗試為了改善分液漏斗，以經過許多的嘗試。克雷格逆流分布儀是其中一個最引人注意的突破。這套精妙的儀器，把一系列的分液漏斗有效的排成鏈，重復的進行系列的步驟：振搖（混合）、靜置、分離，在重頭開始，這樣就提高了塔板數。假如有足夠的塔板數，那這套儀器可以達到色譜級的分離。液滴逆流色譜（DCCC）在發展過程中又開發出了液滴逆流色譜（DropletCounterCurrentChromatograph）。這個儀器把一系列垂直的管子用毛細管連接起來。液體固定相留有直管中，把流動相慢慢的泵進去，（如果流動相比較重就從上方泵進去；反之，則從下方）。象所有的色譜那樣，組分比較容易溶于流動相中的就移動的快；而比較容易溶于固定相中就滯后了。于是就分離開來了。很顯然，每一個直管只有最小可能的理論塔板數。所以，要有顯著的效能就要用大量這樣的直管。其分離步驟如下：把樣品液滴與流動相混合，通過不移動的固定相，期間沒有發生振搖。液滴的大小與其他溶劑系統的參數限制了溶質在兩質中的分配。靜置最終在直管末端形成，在這兒，流過固定相的流動相在通過毛細管進入下一根直管前先聚集起來。如果流速過高就會干擾靜置并破壞了分離。通過毛細管，流動相從一個直管流入下一個直管，達到分離的目的。DCCC最大的弱點是可允許的流速太低，因此分離時間長，兩相混合差，相對來說，造成效率就低了。離心液滴逆流色譜（centrifugalDCCC，entrifugalplanetarychromatograph,CPC）比DCCC進步的地方就是使用離心加快重力分離。離心液滴逆流色譜
通用的叫法是離心行星色譜，使用很小的直管和毛細管（用多性塑料制成多層的）。一套實用的儀器包含數以千計的直管，可以獲得幾百個理論塔板數的效能。CPC的缺點和DCCC相似，只是用離心代替了地球重力分離。另外，CPC還多了個缺點，就是它在流動相的進口和出口必須使用旋轉流體密封件；而這些密封件性能不好，價格又高，容易損耗，并且限制了泵液的壓力，進而限制了流速和離心速度。高速逆流色譜（High-SpeedCountercurrentChromatography,HSCCC）現代的CCC源于Dr.YoichiroItod（國家健康研究中心）的研究：行星離心分離機，及其能支持的許多可能的柱幾何學。這些巧妙的儀器運用了鮮為人知的離心分離機定子與轉子非旋轉連接的方法。（這超出了當前的討論范圍，涉及到如何達到這一目的的方法，任何一本討論CCC的書對此都有詳細的闡述）。功能上，高速逆流色譜有能自轉和公轉的螺旋盤繞的惰性管（既進行繞自軸旋轉的行星式旋轉，又同時進行繞公軸旋轉。）組成。自軸和公軸（像行星自軸和恒星的公軸）必須同步，這里的討論只集中于不同HSCCC的共同的地方。這兩種旋轉造成螺旋盤繞管中作令人昏亂的運動的液體產生混合區和靜置分層區。這就為色譜形成造就了非常好的分離.逆流分配法（CounterCurrentDistribution，CCD）：逆流分配法又稱逆流分溶法、逆流分佈法或反流分佈法。逆流分配法與兩相溶劑逆流萃取法原理一致，但加樣量一定，並不斷在一定容量的兩相溶劑中，經多次移位萃取分配而達到混合物的分離。本法所採用的逆流分佈儀是由若干乃至數百隻管子組成。若無此儀器，小量萃取時可用分液漏斗代替。逆流層析法- 介紹預先選擇對混合物分離效果較好，即分配係數差異大的兩種不相混溶的溶劑。並參考分配層析的行為分析推斷和選用溶劑系統，通過試驗測知要經多少次的萃取移位而達到真正的分離。逆流分配法對於分離具有非常相似性質的混合物，往往可以取得良好的效果。但操作時間長，萃取管易因機械振盪而損壞，消耗溶劑亦多，應用上常受到一定限制。液滴逆流分配法又稱液滴逆流層析法。為近年來在逆流分配法基礎上改進的兩相溶劑萃取法，對溶劑系統的選擇基本同逆流分配法，但要求能在短時間內分離成兩相，並可生成有效的液滴。由於移動相形成液滴，在細的分配萃取管中與固定相有效地接觸、摩擦不斷形成新的表面，促進溶質在兩相溶劑中的分配，故其分離效果往往比逆流分配法好。且不會產生乳化現象，用氮氣壓驅動移動相，被分離物質不會因遇大氣中氧氣而氧化。本法必須選用能生成液滴的溶劑系統，且對高分子化合物的分離效果較差，處理樣品量小（1克以下），並要有一定設備。應用液滴逆流分配法曾有效地分離多種微量成分如柴胡皂甙原小蘗鹼型季銨鹼等。液滴逆流分配法的裝置，近年來雖不斷在改進，但裝置和操作較繁。目前，對適用於逆流分配法進行分離的成分，可採用兩相溶劑逆流連續萃取裝置或分配柱層析法進行。

色譜分析儀器色譜法（英語：Chromatography，又稱層析）是一種分離和分析方法，在分析化學、有機化學、生物化學等領域有著非常廣泛的應用。色譜法利用不同物質在不同相態的選擇性分配，以流動相對固定相中的混合物進行洗脫，混合物中不同的物質會以不同的速度沿固定相移動，最終達到分離的效果。色譜法起源於20世紀初，1950年代之後飛速發展，並發展出一個獨立的三級學科——色譜學。歷史上曾經先後有兩位化學家因為在色譜領域的突出貢獻而獲得諾貝爾化學獎，此外色譜分析方法還在12項獲得諾貝爾化學獎的研究工作中起到關鍵作用色譜的起源色譜法起源於20世紀初，1906年俄國植物學家米哈伊爾·茨維特用碳酸鈣填充豎立的玻璃管，以石油醚洗脫植物色素的提取液，經過一段時間洗脫之後，植物色素在碳酸鈣柱中實現分離，由一條色帶分散為數條平行的色帶。由於這一實驗將混合的植物色素分離為不同的色帶，因此茨維特將這種方法命名為Хроматография，這個單詞最終被英語等拼音語言接受，成為色譜法的名稱。漢語中的色譜也是對這個單詞的意譯。茨維特並非著名科學家，他對色譜的研究以俄語發表在俄國的學術雜誌之後不久，第一次世界大戰爆發，歐洲正常的學術交流被迫終止。這些因素使得色譜法問世後十餘年間不為學術界所知，直到1931年德國柏林威廉皇帝研究所的庫恩將茨維特的方法應用於葉紅素和葉黃素的研究，庫恩的研究獲得了廣泛的承認，也讓科學界接受了色譜法，此後的一段時間內，以氧化鋁為固定相的色譜法在有色物質的分離中取得了廣泛的應用，這就是今天的吸附色譜。分配色譜的出現和色譜方法的普及薄層色譜分離印表機黑色油墨的組成1938年阿切爾·約翰·波特·馬丁和理察·勞倫斯·米林頓·辛格準備利用胺基酸在水和有機溶劑中的溶解度差異分離不同種類的胺基酸，馬丁早期曾經設計了逆流萃取系統以分離維生素，馬丁和辛格準備用兩種逆向流動的溶劑分離胺基酸，但是沒有獲得成功。後來他們將水吸附在固相的矽膠上，以氯仿沖洗，成功地分離了胺基酸，這就是現在常用的分配色譜。在獲得成功之後，馬丁和辛格的方法被廣泛應用於各種有機物的分離。1943年馬丁以及辛格又發明了在蒸汽飽和環境下進行的紙色譜法。氣相和色譜理論的出現1952年馬丁和詹姆斯提出用氣體作為流動相進行色譜分離的想法，他們用矽藻土吸附的矽酮油作為固定相，用氮氣作為流動相分離了若干種小分子量揮發性有機酸。氣相色譜的出現使色譜技術從最初的定性分離手段進一步演化為具有分離功能的定量測定手段，並且極大的刺激了色譜技術和理論的發展。相比於早期的液相色譜，以氣體為流動相的色譜對設備的要求更高，這促進了色譜技術的機械化、標準化和自動化；氣相色譜需要特殊和更靈敏的檢測裝置，這促進了檢測器的開發；而氣相色譜的標準化又使得色譜學理論得以形成色譜學理論中有著重要地位的塔板理論和Van Deemter方程，以及保留時間、保留指數、峰寬等概念都是在研究氣相色譜行為的過程中形成的。高效液相色譜1960年代，為了分離蛋白質、核酸等不易汽化的大分子物質，氣相色譜的理論和方法被重新引入經典液相色譜。1960年代末科克蘭、哈伯、荷瓦斯、莆黑斯、里普斯克等人開發了世界上第一台高效液相層析儀，開啟了高效液相色譜的時代。高效液相色譜使用粒徑更細的固定相填充色譜柱，提高色譜柱的塔板數，以高壓驅動流動相，使得經典液相色譜需要數日乃至數月完成的分離工作得以在幾個小時甚至幾十分鐘內完成。1971年科克蘭等人出版了《液相色譜的現代實踐》一書，標誌著高效液相色譜法（HPLC）正式建立。在此後的時間裡，高效液相色譜成為最為常用的分離和檢測手段，在有機化學、生物化學、醫學、藥物開發與檢測、化工、食品科學、環境監測、商檢和法檢等方面都有廣泛的應用。高效液相色譜同時還極大的刺激了固定相材料、檢測技術、數據處理技術以及色譜理論的發展。原理色譜過程的本質是待分離物質分子在固定相和流動相之間分配平衡的過程，不同的物質在兩相之間的分配會不同，這使其隨流動相運動速度各不相同，隨著流動相的運動，混合物中的不同組分在固定相上相互分離。根據物質的分離機制，又可以分為吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜、凝膠色譜、親和色譜等類別吸附色譜
吸附色譜利用固定相吸附中對物質分子吸附能力的差異實現對混合物的分離，吸附色譜的色譜過程是流動相分子與物質分子競爭固定相吸附中心的過程吸附色譜的分配係數表達式如下 其中表示被吸附於固定相活性中心的組分分子含量，表示游離於流動相中的組分分子含量。分配係數對於計算待分離物質組分的保留時間有很重要的意義。分配色譜分配色譜利用固定相與流動相之間對待分離組分溶解度的差異來實現分離。分配色譜的固定相一般為液相的溶劑，依靠圖布、鍵合、吸附等手段分布於色譜柱或者擔體表面。分配色譜過程本質上是組分分子在固定相和流動相之間不斷達到溶解平衡的過程。分配色譜的狹義分配係數表達式如下：式中代表組分分子在固定相液體中的溶解度，代表組分分子在流動相中的溶解度。離子交換色譜離子交換色譜利用被分離組分與固定相之間發生離子交換的能力差異來實現分離。離子交換色譜的固定相一般為離子交換樹脂，樹脂分子結構中存在許多可以電離的活性中心，待分離組分中的離子會與這些活性中心發生離子交換，形成離子交換平衡，從而在流動相與固定相之間形成分配。固定相的固有離子與待分離組分中的離子之間相互爭奪固定相中的離子交換中心，並隨著流動相的運動而運動，最終實現分離。離子交換色譜的分配係數又叫做選擇係數，其表達式為：其中表示與離子交換樹脂活性中心結合的離子濃度，表示游離於流動相中的離子濃度。凝膠色譜凝膠色譜的原理比較特殊，類似於分子篩。待分離組分在進入凝膠色譜後，會依據分子量的不同，進入或者不進入固定相凝膠的孔隙中，不能進入凝膠孔隙的分子會很快隨流動相洗脫，而能夠進入凝膠孔隙的分子則需要更長時間的沖洗才能夠流出固定相，從而實現了根據分子量差異對各組分的分離。調整固定相使用的凝膠的交聯度可以調整凝膠孔隙的大小；改變流動相的溶劑組成會改變固定相凝膠的溶漲狀態，進而改變孔隙的大小，獲得不同的分離效果。
親和色譜關於保留時間的理論保留時間是樣品從進入色譜柱到流出色譜柱所需要的時間，不同的物質在不同的色譜柱上以不同的流動相洗脫會有不同的保留時間，因此保留時間是色譜分析法比較重要的參數之一。保留時間由物質在色譜中的分配係數決定：式中
表示某物質的保留時間，
是色譜系統的死時間，即流動相進入色譜柱到流出色譜柱的時間，這個時間由色譜柱的孔隙、流動相的流速等因素決定。K為分配係數，

表示固定相和流動相的體積。這個公式又叫做色譜過程方程，是色譜學最基本的公式之一。在薄層色譜中沒有樣品進入和流出固定相的過程，因此人們用比移值標示物質的色譜行為。比移值是一個與保留時間相對應的概念，它是樣品點在色譜過程中移動的距離與流動相前沿移動距離的比值。與保留時間一樣，比移值也由物質在色譜中的分配係數決定：其中
是比移值，K表示色譜分配係數，表示固定相和流動相的體積。基於熱力學的塔板理論
塔板理論是色譜學的基礎理論，塔板理論將色譜柱看作一個分餾塔，待分離組分在分餾塔的塔板間移動，在每一個塔板內組分分子在固定相和流動相之間形成平衡，隨著流動相的流動，組分分子不斷從一個塔板移動到下一個塔板，並不斷形成新的平衡。一個色譜柱的塔板數越多，則其分離效果就越好。根據塔板理論，待分離組分流出色譜柱時的濃度沿時間呈現二項式分布，當色譜柱的塔板數很高的時候，二項式分布趨於常態分佈。則流出曲線上組分濃度與時間的關係可以表示為：這一方程稱作流出曲線方程，式中
為t時刻的組分濃度；
為組分總濃度，即峰面積；
為半峰寬，即常態分佈的標準差；
為組分的保留時間。根據流出曲線方程人們定義色譜柱的理論塔板高度為單位柱長度的色譜峰方差：理論塔板高度越低，在單位長度色譜柱中就有越高的塔板數，則分離效果就越好。決定理論塔板高度的因素有：固定相的材質、色譜柱的均勻程度、流動相的理化性質以及流動相的流速等。塔板理論是基於熱力學近似的理論，在真實的色譜柱中並不存在一片片相互隔離的塔板，也不能完全滿足塔板理論的前提假設。如塔板理論認為物質組分能夠迅速在流動相和固定相之間建立平衡，還認為物質組分在沿色譜柱前進時沒有徑向擴散，這些都是不符合色譜柱實際情況的，因此塔板理論雖然能很好地解釋色譜峰的峰型、峰高，客觀地評價色譜柱地柱效，卻不能很好地解釋與動力學過程相關的一些現象，如色譜峰峰型的變形、理論塔板數與流動相流速的關係等。基於動力學的范第姆特方程范第姆特方程 （Van Deemter
equation）是對塔板理論的修正，用於解釋色譜峰擴張和柱效降低的原因。塔板理論從熱力學出發，引入了一些並不符合實際情況的假設，Van Deemter方程則建立了一套經驗方程來修正塔板理論的誤差。

分離純化紫杉醇的方法....!!!!
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本發明一種分離純化紫杉醇的方法，將紫杉醇麤品用氯仿或丙酮溶解後加入矽膠或氧化鋁或大孔吸附樹脂制得物料幹樣，在兩根串聯的層析柱中第一根層析柱的下部裝入固定相氧化鋁、第一根層析柱上部裝入物料幹樣、第二根層析柱中裝入固定相矽膠或大孔吸附樹脂，用三元流動相進行洗脫得到含有紫杉醇的洗脫液，洗脫液經濃縮、結晶、乾燥後製得紫杉醇半成品，紫杉醇半成品經二次柱層析分離後製得高純度的紫杉醇產品。本發明通過對分離純化紫杉醇的層析柱進行結構改進，實現在一個層析系統中使用兩種固定相，同時採用三元流動相進行洗脫，增加了固定相和目標產物之間的選擇性，簡化了生產工藝，提高了分離效率，降低了生產成本。  摘要：對紫杉醇的分離純化技術作簡要綜述。------------.

關鍵詞：紫杉醇分離提取紫杉醇(Taxo1)是從短葉紅豆杉樹皮中分離得到的一種四環二萜化合物。1992年12月29日美國FDA正式批准紫杉醇作為治療晚期卵巢癌的新抗癌藥物。由於該藥療效確切、副作用小，在美國上市後銷售情況一直很好，並保持著20%以上的年銷售增長率。2000年該藥的銷售額已超過10億美元。紫杉醇被當今世界上公認為廣譜、活性最強的抗癌藥物，尤其是對子宮癌、卵巢癌、乳腺癌具有特殊的療效，它的間世被譽為20世紀90年代國際上抗癌藥三大成就之一［1］。由於紫杉醇具有獨特的抗癌機理和廣譜高效的抗癌活性，其需求量與日劇增。目前，紫杉醇的來源主要有：(1)天然紅豆杉植物提取；(2)人工種植；(3)化學半合成；(4)化學全合成；(5)生物合成；(6)真菌發酵；( 7)植物組織細胞培養；(8)基因工程［2］。迄今為止，紫杉醇的主要來源仍是從天然紅豆杉屬植物的莖皮中提取。但是，由於紅豆杉生長緩慢，又極少成林，資源十分有限，且紅豆杉中紫杉醇的含量很低，要獲得1kg紫杉醇，需要10kg樹皮，約4000棵紅豆杉樹［3］。目前紫杉醇的分離純化工藝中普遍存在周期長、分離效率低的問題。紫杉醇屬於不穩定物質，易受環境條件影響發生異構或降解。分離週期長增加了紫杉醇降解的概率，低的分離效率不僅增加生產成本，又使有限的紫杉醇資源浪費。因此，對紫杉醇的提取純化技術進行深入細緻的研究，建立高效、快捷、經濟、實用的提取純化方法是目前亟待解讀的問題。本文對近年來國內外紫杉醇的主要的分離純化技術作一簡要綜述。1紫杉醇的粗提1.1提取溶劑餘廣鱉等人［4］研究發現，在乙酸乙酯、丙酮、甲醇、乙醇、乙醚、二氯甲烷、三氯甲烷等7種溶劑中，單一溶劑的浸提效果以甲醇最好。鍋田助等人［5］對提取溶劑也作了系統研究，結果表明：在乙酸乙酯、乙醚、丙酮、甲醇和V(乙酸乙酯)：V(丙酮)=1：1等溶劑中，以V(乙酸乙酯)：V(丙酮)=1：1的提取效果最好，其價格與甲醇相當，且可回收再利用，因此有望用於紫杉醇的工業化生產中。1.2提取方法提取常用的方法有冷浸法、滲漉法和索氏回流法。冷浸法和滲漉法均耗時較長，而索氏回流時的高溫易造成紫杉醇的降解。徐禮桑等人［6］採用V(甲醇)：V(二氯甲烷)=95：5作為提取溶劑，所需提取時間為35～60min。在溶劑系統不變的情況下，將原料與溶劑的混合物進行超聲振盪，使提取達到平衡的時間縮短到5min。超聲技術的引入不僅縮短了提取達到平衡所需的時間，還可以使提取在低溫下進行，從而避免了紫杉醇在高溫下轉化為其它物質而造成收率降低［7］。2紫杉醇的純化2.1固液萃取(SLE) 紅豆杉的粗提浸膏中往往含有一些無極性或低極性的物質。如油脂、蠟、葉綠素、精油、甾醇和樹脂等，常採用一些低極性的有機溶劑進行去除。李春斌等人採用石油醚對浸膏進行固液萃取，發現隨著石油醚用量的增加浸出的雜質的數量也在增加，但當石油醚用量達浸膏的5倍時，浸出的雜質數量不再有明顯的增加［8］。惠俊峰採用正己烷對浸膏進行除雜，發現和原始浸膏的量相比，6倍體積的正己烷是一個優化值［9］。2.2液液萃取(LLE) 紅豆杉的粗提浸膏中也含有一些強極性物質。如鞣質、氨基酸、糖和鹽等，常採用液液萃取的方式進行去除。Rao等人採用了三氯甲烷和水體系［10］；Witherup採用二氯甲烷和水體系［11］；郭立佳採用甲醇和正己烷及三氯甲烷和0.5mol/L的Na2CO3溶液體系12］。液液萃取簡單易行，不需要特殊設備，但提取物雜質含量高，回收率低，分離效果差，還常常伴隨著難以消除的乳化現象。2.3固相萃取(SPE) 固相萃取是近20年才發展起來的一項技術，此方法應用於紫杉醇的純化可以快速除去浸膏中與紫杉醇極性相差較大的脂、蠟及色素等雜質。張志強等人系統研究了矽膠、C18矽膠和氧化鋁3種固相柱的萃取效果，發現氧化鋁固相柱效果最好［13］。同液液萃取相比，固相萃取具有節省時間、降低溶劑用量、選擇性好和收率高的優點。由於紅豆杉粗提物中雜質種類多、含量高，若用固相萃取直接處理粗提物將不僅加重填料的回收負荷、縮短填料的使用壽命，並且會因傳質阻力加大，固定相對紫杉醇的吸附不徹底，而增大紫杉醇的損失。因此，在紫杉醇製備工藝中，液液萃取和固相萃取多串聯使用。2.4沉澱法Hong等人利用紫杉醇在己烷溶液中產生沉澱的性質分離精製紫杉醇，即先用有機溶劑浸提植物體，再用合成吸附劑處理粗提物，過濾，向濾液中加入己烷就可以得到紫杉醇沉澱［14］。Foo等人則通過向醇等極性溶劑的提取物中添加水而使紫杉醇沉澱析出［15］。沉澱法設備簡單、成本低廉且技術較為成熟，可廣泛應用於紫杉醇的規模化生產中，但一般只能達到初步純化的目的，還需要進一步的精製。2.5柱層析法柱層析法是目前分離純化紫杉醇最廣泛採用的方法。常用的正相柱如矽膠、氧化鋁，反相柱有C18、苯基柱等，還包括其他一些吸附劑如樹脂等。張志強等人採用正相氧化鋁和反相C18層析組合分離純化紫杉醇，得到了95%以上的純度［16］。戴惠芳採用以矽膠為填充料的正相柱，用乙酸叔丁酯為單流動相解決了紫杉醇的分離［17］。紫杉醇是一種二萜類化合物，具有多環結構，容易被帶苯環的吸附劑特異性吸附，所以近年來帶有苯環的樹脂被較多地應用到紫杉醇的純化過程。張志強等人採用聚苯乙烯型大孔樹脂(201×4)層析，有效地從紅豆杉甲醇浸膏中分離紫杉醇和脫除色素，樣品中紫杉醇含量從0.65%提高到了2.15%，回收率達99.6%［18］。該方法不僅能用於植物浸膏中紫杉醇的提取，而且適合從大量真菌培養液中分離紫杉醇。樹脂層析法操作簡單，生產成本低，且處理量大，有望用於紫杉醇的規模化生產中。2.6薄層層析法(TLC) 目前，在使用固相萃取或柱層析法從紅豆杉中提取紫杉醇及其類似物過程中，大多使用TLC法對流分進行跟踪檢測，用以指導流分的合併。Sally等人發展了一種雙向TLC技術可以從大量的紫杉烷類化合物中分離紫杉醇和三尖杉寧鹼［19］。莊曉蕾等人嘗試將TLC和紫外分光光度法結合起來定量測定紫杉醇，取得了良好的效果［20］。在分離純化紫杉醇和三尖杉寧鹼的過程中，由於二者的結構、性質非常接近，在使用TLC跟踪檢測時，二者多以復斑出現，無法指導流分的合併。雒麗娜研究發現，當使用二氯甲烷-正己烷-甲醇-三乙胺(體積比4.5：3.4：0.5：1.0)四元體係作為TLC展開劑時，在矽膠薄層板上可以徹底分離紫杉醇和三尖杉寧鹼［21］。3.結語新方法和新技術的不斷引入，經典方法的不斷優化必將推動紫杉醇生產的低成本、高效率的產業化進程，改變當前紫杉醇供不應求、價格高居不下的局面，並促進醫藥衛生行業的發展及人類健康事業的進步。參考文獻1方起程，方唯碩。中草藥，1997，28（A10）：1~5 2趙廣河，張培正。紫杉醇提取純化技術研究進展［J］.食品與發酵工業2008，34（5）：138~142 3范俊安，湯國華，舒光明,等。論紅豆杉植物資的保護與再生［J］.中國中藥雜誌，1996，21(7)：389 4餘廣鱉，梅興國，柯鐵，等。不同溶劑浸取紅豆杉細胞中的紫杉醇的研究［J］．華中理工大學學報，2000，28(11)：839 5鍋田憲助，田崎弘之，江部洋史，等．日本：特平，6-157329。1994 06-0310 6徐禮桑，劉愛茹。紅豆杉中紫杉醇的高效液相色譜法測定［J］．藥學學報，1991，26(7)：537~539 7吳倩，高慶平，王正平。紫杉醇的提取與初分離工藝研究［J］．化學工程師，2004，110(11)：40 8李春斌，佟憬憬，范聖第。東北紅豆杉紫杉醇的提取純化與HPLC檢測［J］．大連民族學院學報，2005，7(5)：23 9惠俊峰。從紅豆杉中提取紫杉醇及10-DAB的研究［D］.西安：西北大學，2006 10 Rao KV, GainesvilleF. Isolating and
purification of taxol and its natural analogue［P］，US．patent，5380916．1995 14 11Witherup KM , Look SA，Stasko MW ，eta1．Taxus spp.Needless contain amounts of taxol
comparable to the bark of Taxus brevifolia：Analysis and Isolation［J］．J Nat Prod．1990，53(5)：1249~1255 12郭立佳。紫杉醇分離純化工藝的研究［D］.無錫：江南大學，2006 13張志強，王雲山，田桂蓮，等。固相萃取及反相層析分離提純紫杉醇［J］．藥物生物技術，2000，7(3)：157~160 14 HongSS，SongBK，Kim JH，eta1．A method for mass production of taxol from
Taxus genus plant［P］，WO. 9634973．1996-11-07 15 Foo，Samuel Slang Kiang，Bai，Yili，eta1．Method for high yield and large scale extraction of
paclitaxel from paclitaxel containing material［P］，US，6136989，2000-10-24 16張志強，蘇志國。正相和反相柱層析組合分離純化紫杉醇［J］.生物工程學報，2000，16(1)：69~73 17戴惠芳，梅忠，須媚，等。紫杉醇、三尖杉寧鹼和7-表-10-去乙酰基紫杉醇的分離及7-表-紫杉醇的轉化研究［J］.中國藥物化學雜誌，2003，13(5)：288~290 18張志強，許建峰，蘇志國。樹脂層析法脫色和濃縮紫杉醇［J］.高校化學工程學報，1999，13(2)：161~164 19 Sally L，Muschik GM ，Issaq HJ．Multimodal thin layer chromatographic
separation of taxol and related compounds from Taxus Brevifolta［J］. Journal of Liquid Chromatography，1989，12(11)：2133~2143 20莊曉蕾，於樹宏，王人為，等。TLC-紫外分光光度法定量檢測紫杉醇［J］.生物技術，2001，11(1)：45~47 21雒麗娜。紫杉醇和三尖杉寧鹼的分離純化及檢測方法研究［D］.北京：北京化工大學，2005

 Novasep Supersep^TM 超臨界流體層析(SFC)簡介 Riffinate殘液

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毛細管電泳(capillary electrophoresis, CE)又叫高效毛細管電泳(HPCE), 是近年來發展最快的分析方法之一。1981年Jorgenson和Lukacs首先提出在75μm內徑毛細管柱內用高電壓進行分離, 創立了現代毛細管電泳。1984年Terabe等建立了膠束毛細管電動力學色譜。1987年Hjerten 建立了毛細管等電聚焦, Cohen和Karger提出了毛細管凝膠電泳。1988～1989年出現了第一批毛細管電泳商品儀器。短短幾年內, 由于CE符合了以生物工程為代表的生命科學各領域中對多肽、蛋白質(包括酶，抗體)、核苷酸乃至脫氧核糖核酸(DNA)的分離分析要求, 得到了迅速的發展。
高效毛細管電泳的基本原理