葉導芽: MS1/2 +BA(0．1～0．5)mg／L+NAA(0．01～0．05)mg／L
芽增殖: MS1/2+BA(0．1～0．5)mg／L+NAA(0．01～0．05)mg／L+ GA3(0．05～0．50)mg／L
株生根:MS1/2+NAA(0．01～0．05)mg／L
葉導芽: MS1/2 +BA0．5mg／L+NAA0．05mg／L
芽增殖: MS1/2+BA0．5mg／L+NAA0．05mg／L+ GA3 0．5mg／L
株生根:MS1/2+NAA0．05mg／L
葉導芽: MS1/2 +BA0．2mg／L+NAA0．02mg／L
芽增殖: MS1/2+BA 2m g／L+NAA0．2mg／L
株生根: MS1/2+NAA0．02mg／L
…………………………………………………………TTC
安徽農業科學，2004 Journal of Anhui
A cultural Sciences
三倍體速生楊樹的組織培養及應用 :
以楊樹葉片為外植體，進行組織培養試驗研究。結果表明：葉脈和葉柄處極易產生不定芽；培養基中BA濃度是影響不定芽形成的關鍵；BA濃度在0．5～2mg／L範圍內均有不定芽產生，BA1．0mg／L與NAA0．05Ing／L配合使用，可促進不定芽的形成；培養基中添加GA3 0．1～0．2mg／L，可以提高不定芽的發生頻率。在此基礎上建立楊樹葉片離體再生體系，利用該體系能夠獲得高的芽苗再生頻率，但是不同品種間略有差異。5月底將組培苗栽植室外苗圃內，精心管理，當年就能長成2～3m高的楊樹出圃 定植。 楊樹是我國北方主要的平原綠化樹種，其防風固沙 能力特別強，素以成材快、材質好受到人們的喜愛。近年 來，楊樹苗木在市場上供不應求。我國科研部門根據生產需要引進培育出的速生楊樹系列新品種，相對於老品種而言，具有生長快、栽培週期短、抗逆性強、材質特別好 等優點，故在全國各地發展很快。但是速生楊樹常規繁殖係數較低，大田生產週期長，短期內難以獲得大量苗木。筆者採用楊樹葉片作為外植體材料，建立了高效組 培快繁體系。利該體系筆者在2002年6月至2003年3 月共生產出楊樹試管苗6518餘株，並通過大田切段扡插繁殖生產出楊樹苗3萬餘株。
1 材料與方法
1．1 供試材料 速生楊樹天演l、2號，108，110 4個品 種，以其當年生幼嫩葉片為外植體。 1．2 不定芽誘導 取楊樹葉片，用濃度0．1％升汞消毒8
min，無菌水洗淨後在超淨工作臺上用手術刀切割成1 cm2 大小方塊，葉背向下平放於不同濃度BA和NAA配比的 培養基中，培養溫度25℃，光照時間 14 h／d，光照強度 2
000 lx，培養10 d後調查外植體上萌發的不定芽數。 1．3 添加GA3培養 將得的不定芽材料轉入添加GA3 的培養基中培養，觀察GA3對楊樹增殖的影響。1．4 固液對照培養 在增殖培養過程中，設置固液對照 培養，觀察液體培養的效果。
2 結果與分析
2．1 葉片對離體培養的反應 將葉片外植體接種於MS 培養基上，5
d後葉片邊緣開始膨大，10 d後切口處有小 芽產生，每個外植體可生長出l0～20個小芽，多數小芽從 葉柄及葉脈處長出，而在小方塊中間亦有1～5個散列小 芽。再用剪刀將此小方塊剪碎，接入相同培養基中，很快 從切口邊緣處又長出許多小芽。這樣反復幾次，葉片形態不復存在，而只有芽叢。如不轉接，則切口處芽逐漸長 大，但只有1～2個芽長高，其餘則保持叢生狀態。若一直
不轉接，則易枯死。
2．2 分化培養基的篩選 由表1可見，BA濃度在0．5～ 2．0mg／L範圍內均有不定芽產生，且濃度越高，出芽越 多。NAA單獨使用，不能誘導出芽；在與BA配合時，若濃 度低於0．05 mg／L，外植體顏色發紅，發脆，生長不旺；如
果濃度超過1．0 mg／L，外植體則會發黃枯死。BA與NAA 適當配合，能夠很好地誘導芽的產生，其中MS+BA 1．0 mg／L+NAA
0．05 mg／L對110品種較好；MS+BA 1．5 mg／L +NAA
0．05 mg／L對 108較好；MS +BA 0．8 HI
L+NAA 0．08 mg／L對天演1號較好；MS+BA0．8 mg／L+NAA0．05 mg／L對天演2號較好。
2．3 增殖培養基的篩選 在分化培養基中誘導出不定芽後，如將其直接轉入生根培養基中培養，不久小芽就會 發黃枯死。原因可能是細胞分裂素嚴重不足。因此，宜 採用過渡培養的方法，逐步降低培養基中BA的濃度以適 應生根的需要。由表2可見，BA濃度降低後，生長素NAA濃度相對提高，小苗逐漸脫離矮化叢生狀態，而轉向長高長 壯。另外，在增殖培養基中，NAA濃度也不宜過大，如果 大於0．1 mg／L，芽會逐漸黃化枯死。綜上述,增殖培養 基採用MS +BA(0．2～0．5)mg／L+NAA(0．01～0．05)mg／L 較好
表1 不同濃度BA與NAA配比對楊樹葉片不定芽誘導效果的影響BA濃度 NAA濃度 外 平 數 誘導率 生長勢= nV-,／L mg／L 個／瓶 塊 ％
2.4 GA3對芽分化及增殖的影響 GA3加入誘導培養基 物組織培養及園藝設施栽培研究。 後，可明顯促進芽的分化，每個外植體平均分化出40～50個芽，比未加入GA3的處理平均多分化5～10個芽；GA3 加入增殖培養基後，芽的增殖速度加快，芽紛紛長高。1O d後就可長到2 cm左右，這時即可將芽轉到生根培養基 中生根。GA3濃度越高，長高效果越明顯，但是GA3濃度 宜控制在0．5 mg／L以下。濃度過大，芽迅速長高，但是長 得不充實，容易枯梢，轉到生根培養基中易枯死。在繼代 幾次後，應逐步降低GA3的使用濃度至0．1 mg／L左右，以 避免激素的累積效應。
2．5 液體培養對芽增殖的影響 由表3可見，液體培養 生長快，增殖快，可在短期內獲得大量的芽供轉接用。但是液體培養需搖床設備，淺層培養且受數量限制，操作上不如固體培養方便。
表3 液體培養對芽增殖的影響
2．6 不同品種對培養基的選擇性 根據上述試驗結果，筆者建立了楊樹離體再 生體系，並以天演1、2號，108，110
4個品種進行離體培養比較試驗。結果表明：天演2號最 易誘導產生不定芽，誘導頻率達98．3％；110次之，達 95．6％；108達93．2％；天演1號則為91．5％。這說明不同基因型之間對於該體系反應略有差異。
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