TTCKMC 台灣蔡大川 六美生技 中草藥 組培工廠 蝴蝶蘭組培教學(From1984).全年生產 管理 瓶苗 幼苗 專門外銷!!!

 
六美生技組培工廠=蘭園+組培+生技+養生

 
六美生技組培工廠=蘭園+組培+生技+養生
 

http://researcher.nsc.gov.tw/lp.asp?mp=1696&CtNode=536&CtUnit=539&BaseDSD=13
http://edn.gmg.tw/article/view.jsp?aid=494473&cid=13
1設立獨立工廠. 2生產DHS原料. 3生產加工商品.(4產品規劃.5產能規劃.6成本分析.7市場推廣.8市場調查.9人力規劃.10管理運作)
http://researcher.nsc.gov.tw/lp.asp?mp=1696&CtNode=536&CtUnit=539&BaseDSD=13

http://www.chemicalbook.com/ProductChemicalPropertiesCB3273425.htm性狀：白色無臭無味的結晶或粉末，不溶於水，易溶於丙酮、氯仿、乙醚等有機溶劑。

1963年美國化學家瓦尼（MC Wani）和沃爾（Monre E. Wall）首次從一種生長在美國西部大森林中稱謂太平洋杉（Pacific Yew）樹皮和木材中分離到了紫杉醇的粗提物。在篩選實驗紅豆杉中，Wani和Wall發現紫杉醇粗提物對離體培養的鼠腫瘤細胞有很高活性，並開始分離這種活性成份。由於該活性成份在植物中含量極低，直到1971年，他們才同杜克（Duke）大學的化學教授姆克法爾（Andre T. McPhail）合作，通過x-射線分析確定了該活性成份的化學結構——一種四環二萜化合物，並把它命名為紫杉醇（taxol）。
1971年在紅豆杉中發現紫杉醇，發現抗癌機理獨特。
1992年美國政府將專利轉讓給施貴寶，紫杉醇面世。
1994年紫杉醇創世界抗癌藥物全球銷量冠軍。
2000年紫杉醇銷量創百億（後受原料供應未有進一步上升）
2002年中央發文嚴禁砍伐野生紅豆杉，鼓勵人工種植。
2004年施貴寶專利到期，全球更多藥廠介入紫杉醇生產。
2004年華源開始運作紅豆杉項目並籌建直屬紫杉醇提煉加工廠，目標成為：中國乃至亞洲最大紅豆杉基地。
2005年中央再次發文，全國普查紅豆杉資源，鼓勵種植。
2005年此項目接受個人投資者投資。
迄今為止，國際市場上只有2種紫杉醇原料藥：一種來自各种红豆杉樹皮；另一種是從歐洲觀賞紫杉枝條裡提取出“10-漿果赤黴鹼”，然後再經半合成而成，即多西他賽（多烯紫杉醇），其結構與天然提取紫杉醇十分相似。這兩種原料藥均為國際醫藥市場上的暢銷原料藥產品，並長期處於供不應求狀態，據有關部門估計，紫杉醇原料藥與多烯紫杉醇原料藥的銷量之比大約為10:1。
在美國，紫杉醇注射劑（商品名：Paclitaxel）主要由百時美施貴寶獨家生產，現已有大約二三家製藥企業生產紫杉醇原料藥和製劑，但該市場基本上為百時美施貴寶所壟斷，其它幾家企業生產的紫杉醇製劑銷售額合計隻及百時美施貴寶的一個零頭。而多西他賽原料藥和製劑則主要由法國普朗克公司以及英國、意大利等幾 ​​家公司合作生產，以普朗克的產量最大。
紫杉醇在世界各國均為醫院首選的抗腫瘤藥物。近幾年來世界各國的腫瘤發病率比10年前已提高近一倍，肺癌、乳腺癌和卵巢癌等惡性腫瘤也呈多發趨勢，這些癌症病人均為紫杉醇的主要使用者。從總體上看，在沒有一種植物抗癌新藥能取代其位置之前，紫杉醇的銷量只會上升，不會下降。
據世界衛生組織發布的最新數字，美國現已成為世界第一癌症高發國，其每年新增癌症病例140萬人，約佔當年全球癌症病人的14％。美國至今仍為紫杉醇最大消費國。隨著美國癌症發病率的提高，紫杉醇作為抗晚期惡性腫瘤的主要藥物，可以相信，其銷量將繼續保持快速上升勢頭。美國和其它發達國家在十幾年來的臨床使用過程中早已總結出一套紫杉醇與其它抗癌藥物的各種最佳配伍方案，其醫療部門已離不開紫杉醇這一“中堅力量”，因此，對於紫杉醇原料藥的需求量也會呈水漲船高之勢。
江蘇紅豆集團已於三四年前投資數千萬元在華東地區建起了最大的紅豆杉速生林基地，總面積達7400畝，現人工栽培的紅豆杉樹苗早已鬱鬱成林，並得到聯合國有關部門的好評和國內林業部領導的高度讚揚。預計今年紅豆集團將開工生產紫杉醇原料藥和注射劑，設計年產600萬支紫杉醇注射劑，該項目已通過國家藥檢局和省、市藥監局的驗收。
另外，我國東北林區以及雲貴兩省一些山區也在大力發展紅豆杉速生林栽培技術，在今後3~5年內，這些地方的有望形成新的紅豆杉林區，從而為國內提供寶貴的紫杉醇原料藥新來源。湖南、湖北等南方山區省也在建設紅豆杉栽培基地，作為幫助當地農民脫貧致富的措施之一。按這一發展趨勢，今後幾年我國紫杉醇原料藥年產量有望超過100公斤大關，從而成為世界主要紫杉醇原料藥和製劑的生產大國。
它包括ａ、萃取，以紅豆杉為原料獲得含有紫杉醇的提取物；ｂ、去除膠質，除去提取物中的膠質雜質；ｃ、分離純化。其特徵在於：紫杉醇生產工藝如下： 紅豆杉樹皮粉碎（越細越好），８５％～９５％酒精（料液比是多少？）３５－５５℃熱回流浸提三次（每一次需要多少時間？），５０－７０℃真空減壓濃縮至熱測比重１．１～１．２ｇ／ｍｌ，氯仿萃取，萃取液濃縮成膏狀，得紫杉醇含量１％氯仿膏，將紫杉醇含量１％氯仿膏加氯仿溶解完全，加矽膠攪拌均勻，涼乾，過篩，填裝到層析柱中，氯仿－甲醇梯度洗脫，ＴＬＣ檢測，分段合併濃縮，得紫杉醇含量５～８ ％半成品，將紫杉醇含量５～８％半成品加丙酮溶解完全，加矽膠攪拌均勻，涼乾，過篩，填裝到層析柱中，丙酮－石油醚梯度洗脫，ＴＬＣ檢測，分段合併濃縮，得紫杉醇含量２０～２５％半成品，用丙酮－石油醚系統結晶３～４次，抽濾，５０℃真空減壓乾燥，得紫杉醇含量７５～８０％半成品，１６Ｍｐａ壓力層析分離，ＴＬＣ檢測，分段合併濃縮，目標段濃縮物丙酮－石油醚結晶，抽濾，乾燥，得紫杉醇含量≥９９．５％成品； 去除膠質的過程為：高壓矽膠層析柱層析去除膠質，同時將紫杉烷化合物分離為紫杉醇、三尖杉寧鹼、７－表紫杉醇３部分。 
由紫杉樹皮、木質根部、樹葉、嫩枝和幼苗中分離提純的天然產物，含量以樹皮中最高。紫杉在中國植物學誌中的學名為紅豆杉，植物分類歸裸子植物亞門，松杉綱，紫杉目，紅豆杉科，紅豆杉屬。紅豆杉科含5屬23種，我國有4屬12種和1變種，分別為西藏紅豆杉或喜馬拉雅紅豆杉(Taxus wallichinanaZucc.)，雲南紅豆杉(Taxus yunnanensis)，南方紅豆杉(Taxus chinensis vat． Mairei)和東北紅豆杉(Taxus cuspidata)。分佈在西藏、雲南、貴州、四川、廣西、廣東、湖南、湖北、江西、福建、浙江、安徽、河南、山西、陝西、甘肅和吉林山區。
由紅豆杉屬植物的樹皮或樹葉中提取。紅豆杉樹皮或樹葉陰乾，磨細後，和95%乙醇提取。提取液濃縮至乾，剩餘物用水和二氯甲烷混合攪拌。靜置分出有機層，水層用二氯甲烷提取多次。提取液和有機層合併後，濃縮至乾。剩餘物溶入醋酸乙酯-甲醇(3：1)，和新鮮矽藻土拌和後，減壓蒸除溶劑。剩餘的粉末進行快速柱層析，先用己烷洗，後用二氯甲烷洗脫。收集後者，減壓蒸去二氯甲烷。剩餘物溶於醋酸乙酯，用70套(每套3～4根)裝有矽膠的中壓快速色譜柱進行層析，用不同配比的己烷-丙酮洗脫。收集含產物的組分，濃縮。剩餘物再經裝有矽膠的中壓快速色譜柱純化，用不同配比的甲醇-二氯甲烷洗脫。收集含產物的組分，減壓濃縮至於。剩餘物再經製備型高效液相色譜儀分離，得到的產物再用含水甲醇重結晶2次，即得紫杉醇純品。產率：樹皮0.028%，樹葉0.0088%。收率：樹皮93.3%，樹葉88%。熔點212～214℃，[α] _D ²⁰ -49°(1%，氯仿)。
中國紅豆杉莖皮經粉碎，陰乾後，用1％檸檬酸水溶液浸泡24h後開始滲漉。用二氯甲烷萃取滲漉液，萃取液乾燥後，濃縮，真空抽乾。用矽膠進行2次柱層析，收集的流出液中含有紫杉醇和三尖杉寧鹼。基於它們側鏈結構的不同，把它們溶於四氯化碳中加溴，只對三尖杉寧鹼進行溴化，再經矽膠柱層析，可得只含紫杉醇的流出液，經處理後，得紫杉醇精品，含量99.19%，收率​​4.5×10 ^-5，回收率70%。
一種高效分離純化紫杉醇的方法名稱:一種高效分離純化紫杉醇的方法申請（專利）號: CN200610047378.2申請日: 2006.08.03 公開（公告）號: CN101020671公開（公告）日: 2007.08.22 主分類號: C07D305/14(2006.01 )I範疇分類: 分類號: C07D305/14(2006.01)I 優先權: 申請（專利權）人:瀋陽天峰生物工程技術有限公司地址: 110000遼寧省瀋陽市於洪區姚家村發明（設計）人:雷茂林;王繼文;趙餘慶;姜彬惠;周鑫宏;楊曉光國際申請: 國際公佈: 進入國家日期: 專利代理機構:瀋陽傑克知識產權代理有限公司代理人:李宇彤分案申請號: 頒證日:光盤號: D0734

摘要: 本發明涉及一種高效分離純化紫杉醇的方法，它具有工藝簡單、產物回收率高的特點。高效分離純化紫杉醇的過程為：萃取，去除膠質，分離純化。去除膠質的過程為：高壓矽膠層析柱層析去除膠質，同時利用丙酮-石油醚系統結晶，將紫杉烷化合物分離為紫杉醇、三尖杉寧鹼、7-表紫杉醇3部分。將提取物為紫杉醇含量為5-25％的樣品，高壓矽膠層析柱層析，以乙酸乙酯一環己烷洗脫，目標物紫杉醇段餾分濃縮乾燥，丙酮—石油醚結晶3次，抽濾，50℃ 真空減壓乾燥得到純度為65％的紫杉醇，紫杉醇收率達到80％。本發明為大批量製備紫杉醇提供了一種工藝簡單方便、產物回收率高、成本低廉的新方法。使用本方法製備的紫杉醇含量≥99.5％、三尖杉寧鹼含量為0.15％、7-表紫杉醇含量為0.10％。主權項: 1、一種高效分離純化紫杉醇的方法，它包括a、萃取，以紅豆杉為原料獲得含有紫杉醇的提取物；b、去除膠質，除去提取物中的膠質雜質；c、分離純化；其特徵在於：紫杉醇生產工藝如下：紅豆杉樹皮粉碎，85％～95％酒精35 -55℃ 熱回流浸提三次，50 -70℃ 真空減壓濃縮至熱測比重1.1～1.2g
/ml，氯仿萃取，萃取液濃縮成膏狀，得紫杉醇含量1％氯仿膏，將紫杉醇含量1％氯仿膏加氯仿溶解完全，加矽膠攪拌均勻，涼乾，過篩，填裝到層析柱中，氯仿-甲醇梯度洗脫，TLC檢測，分段合併濃縮，得紫杉醇含量5～8％半成品，將紫杉醇含量5～8％半成品加丙酮溶解完全，加矽膠攪拌均勻，涼幹，過篩，填裝到層析柱中，丙酮-石油醚梯度洗脫，TLC檢測，分段合併濃縮，得紫杉醇含量20～25％半成品，用丙酮-石油醚系統結晶3～4次，抽濾，50℃ 真空減壓乾燥，得紫杉醇含量75～80％半成品，16Mpa壓力層析分離，TLC檢測，分段合併濃縮，目標段濃縮物丙酮-石油醚結晶，抽濾，乾燥，得紫杉醇含量≥99.5％成品；去除膠質的過程為：高壓矽膠層析柱層析去除膠質，同時將紫杉烷化合物分離為紫杉醇、三尖杉寧鹼、7-表紫杉醇3部分。使用本方法製備的紫杉醇含量≥99.5％、三尖杉寧鹼含量為0.15％、7-表紫杉醇含量為0.10％
酒精à氯仿萃取à氯仿溶解à氯仿-甲醇梯度洗脫à丙酮溶解à氯仿-甲醇梯度洗à丙酮溶解à丙酮-石油醚梯度洗3～4次à抽濾à50℃
真空減壓乾燥à16Mpa壓力層析分離à丙酮-石油醚結晶à紫杉醇含量≥99.5%成品à高壓矽膠層析柱層析去除膠質à紫杉烷化合物分離為紫杉醇、三尖杉寧鹼...

耐斯企業集團 愛之味關係企業 愛之味生技事業
地址：621嘉義縣民雄鄉興南村頭橋工業區工業二路11號及12-1號

http://www.co-plant.com/shownews.asp?id=1002

植物類抗腫瘤藥新霸主-----多烯紫杉醇

http://www.widetex.com/productlist.php?secondkidnumber=29&mainkidnumber=21 
懷德生技化學股份有限公司

 
http://wenku.baidu.com/view/d274f7ed0975f46527d3e1e6.html
鐵皮石斛有效成分及藥理作用的研究進展

 
http://www.youtube.com/watch?v=jJp-p_4OSew&feature=related
http://www.youtube.com/watch?v=jJp-p_4OSew&feature=related

http://www.co-plant.com/shownews.asp?id=227
植物不僅為人類的生存和發展提 ​​供了必要的食物，其次生代謝產生的天然成分已被人類廣泛應用於藥品、食品添加劑、風味物質、香料、色素、化妝品、生物殺蟲劑和農用化學品。在已知的3萬多種天然產物中，80%來源於植物[1]。儘管其中的植物生物活性物質並不是很多，但它們與人類健康密切相關，已成為當前生物領域研究關注的重點。它們分屬於醣類、生物鹼、類黃酮、甾醇、萜類、皂苷、多酚類、有機酸以及維生素、色素類等。許多含有這些生物活性物質在植物被成功開發成中草藥。但這些成分在藥用植物中的含量很少，且有的藥用植物栽培困難很多，一時尚難實現大規模人工栽培，如人參、雪蓮、杜仲、黃連；有的容易感染病毒造成品質退化如太子參、地黃等；還有的如肉蓯蓉、麻黃、番紅花等按常規育苗週期長，植株繁殖係數小、再生能力低。生物技術的應用解決了上述問題，使植物生物活性物質的大規模生產成為可能。以細胞工程、基因工程、發酵工程、酶工程為主體的現代生物技術特別是細胞工程技術在植物生物活性物質生產中的應用日益廣泛和深入。迄今為止，全世界已有1 000多種植物被用作組織和細胞培養的材料，半數以上的培養物中生物活性物質含量超過野生狀態的含量。已處於中試階段的植物有：紅豆杉細胞培養生產紫杉醇、紫草細胞培養生產萘醌類化合物；長春花細胞培養生產生物鹼、苦瓜培養生產類胰島素、三七細胞培養生產皂苷和丹參細胞培養生產丹參酮。已實現工業化生產的有：日本黃連生產黃連鹼、人參細胞培養生產人參皂苷、紫草細胞生產紫草寧等。此外，從天山雪蓮細胞培養分離出總黃酮；從冬蟲夏草深層發酵液中分離出蟲草素、蟲草多醣、蟲草酸等30多種化合物；從千層塔培養物中分離出石杉鹼、雷公藤培養物中提取到雷公藤甲素；懷槐細胞培養分離得具有保肝作用的異黃酮；石斛細胞懸浮培養出具有抗腫瘤、增強機體免疫力功效的石斛多醣等[2]。本文介紹細胞工程為主的生物技術在幾種植物生物活性物質生產上的應用，如紫杉醇、懷槐異黃酮、石斛多醣等，包括化學因素（培養基）、物理因素（溫度、光照）以及生物因素、誘導子添加、前體化合物的加入對生物活性物質產生的影響。同時，對生物活性物質的應用前景作了探討，為該領域的進一步研究提供參考。

1紫杉醇--紫杉醇是從紅豆杉科紅豆杉屬(Taxus sp.)植物樹皮、枝葉等部位中分離出的二萜類化合物,對卵巢癌、子宮癌、乳腺癌等10多種癌症具有很好的療效,被譽為20世紀90年代抗腫瘤藥三大成就之一。我國有紅豆杉Taxus chinensis (Pilger) Rehd.、東北紅豆杉T.
cuspidata Sieb. et Zucc.、南方紅豆杉T.chinensis var. mairei、西藏紅豆杉T. wallichiana Zucc.、雲南紅豆杉T.
yunnanensis Cheng et LK Fu等幾種[3] 。自然生長的紅豆杉生長緩慢，紅豆杉樹紫杉醇含量又很低（不到萬分之一），無法滿足需求。目前，國內紫杉醇原料需求量為1 500 kg，年產量卻不足100 kg；全球紫杉醇需求量為5 000 kg，年產量不超過500 kg。採用細胞培養的方法是解決供需矛盾的有效途徑之一。

以東北紅豆杉T.cuspidata和曼地亞紅豆杉T.media（東北紅豆杉與歐洲紅豆杉T. baccdfa的雜交品種）為材料，對不同接種量、培養基種類、蔗糖質量濃度時懸浮細胞體系中紫杉醇的生產量的比較研究結果表明,東北紅豆杉細胞懸浮培養適宜
​​的接種量是2g/瓶、培養基為B5基本培養基、蔗糖質量濃度20～30 g/L時懸浮培養細胞的生長較好。東北紅豆杉懸浮細胞在B5培養基中質量濃度為0.127 mg/L,曼地亞紅豆杉懸浮細胞在B5培養基中質量濃度為0.487 mg/L。東北紅豆杉培養於改良的GB5培養基(添加0.5mg/L的NAA)上培養，產生10個已知的taxoids化合物，有紫杉醇、7-表紫杉醇、紫杉醇C、漿果赤黴素VI（baccatin
VI ）等[4]。南方紅豆杉莖段癒傷組織在不同基本培養基及激素組合的培養基上，其平均鮮重生物量具顯著差異，而乾重生物量無差異。TA或B5基本培養基附加1.0 mg／L NAA和0.5 mg／L BA為其癒傷組織生長的適宜配方[5]。對南方紅豆杉用75種激素處理的實驗中證實NAA 1m g／L+6-BA 1m g／L的處理可獲得最大增長率達2.517[6]。對南方紅豆杉細胞紫杉醇代謝動力學研究表明：在細胞生長的對數期繼代較靜止期繼代的細胞增長率提高1.6倍，同時紫杉醇含量提高了近4倍；對數期繼代的細胞吸收碳源、氮源早於靜止期細胞，而2個處理的細胞對磷酸根和銨根的吸收則無明顯差異。對數期繼代有利於細胞生物量的增殖和紫杉醇的含量的提高。此外，紅豆杉細胞次生代謝的研究中發現中間產物baeⅢ大量積累，約為紫杉醇含量的3倍[6]。近年來針對真菌誘導子對藥用植物細胞培養產生的生物活性物質的影響做過不少研究。在紅豆杉細胞培養第20 d時，加入桔青黴紫杉醇誘導子處理5 d及10 d後，細胞中可溶性蛋白質含量增加，苯丙氨酸解氨酶活性增強，培養基pH值降低，細胞可溶性蛋白質、過氧化物酶與酯酶同工酶電泳掃描圖譜中出現新的譜帶，原有個別譜帶強度發生變化[7]。除了 ​​上述以紅豆杉為原料生產紫杉醇以外，還分離出2株產紫杉醇內生真菌T14和Y3，對其發酵條件的優化研究結果表明，相同條件下，T14產紫杉醇的含量明顯高於Y3產紫杉醇的含量；T14產紫杉醇的最適溫度為30 ℃，最佳pH為5.5，最適碳源為蔗糖，最適氮源為0.3%的氯化銨；間歇補加蔗糖有助於菌體的快速生長紫杉醇的積累；在培養基中添加前體苯丙氨酸對紫杉醇含量的提高有明顯促進作用，添加由苯丙氨酸、乙酸銨和酪氨酸組成的混合前體則作用更為明顯，紫杉醇產量達到352.64 μg/L。另外，培養基中添加Mg2SO4、MnCl2、KH2PO4等微量元素，卻完全抑制了紫杉醇的產生[8]。

2肉蓯蓉苯乙醇苷肉蓯蓉為列當科多年生寄生草本植物,我國有4種1變種，分別為荒漠肉蓯蓉Cistanche deserticola YCM、鹽生肉蓯蓉C.salsa ( CAM ey.)
Benth.et Hook.f.、管花肉蓯蓉C.tubu losa (Schenk) R. Wight、沙蓯蓉C.sinensis GB eck和白花鹽蓯蓉C.
sala (CA Mey.) G. Beck. var. albiflora PF Tuet ZC Lou,生於我國新疆、內蒙古、陝西、甘肅和寧夏等地區的鹽鹼地、乾河溝或戈壁灘上。肉蓯蓉在滋補配方中僅次於人參居第二位,享有“沙漠人參”的美譽。其主要活性成分為苯乙醇苷(Phenylethanoid glycosides, PeGs)，具有抗癌和抗衰老作用[9]。李娟以野生荒漠肉蓯蓉的肉質莖為外植體,經過癒傷組織誘導篩選、建立了穩定的肉蓯蓉細胞株系[10]。癒傷組織培養基配方為B5+CH( 500m g/L)+IAA( 2 m g/L)+BA( 1 m g/L),生長周期為25 d,乾重達到13.2 g/L,其苯乙醇甙含量達到干重的12.9%。並繼而建立了肉蓯蓉細胞懸浮培養體系,培養基配方為MS+GA3
( 10 m g/L)+BA( 0.5 m g/L) +CH( 800 m g/L),生長周期為36d,生長曲線呈“S ”型。乾重達到15.4 g/L,其苯乙醇甙含量達到干重的2.4%,與野生中含量幾乎相等[11]。研究發現有2種生物誘導子殼聚醣、寡聚醣和3種非生物誘導子茉莉酸甲酯、水楊酸和膨潤土能誘導肉蓯蓉懸浮培養細胞苯乙醇甙的生物合成[11-12 ]。肉蓯蓉培養細胞生長與苯乙醇苷的生成及培養基質利用動態變化關係研究表明，細胞內苯乙醇糖甙(PeG)的比生成速率YP/X與肉蓯蓉細胞比生長速率μ大致成線性關係。在培養過程中,培養基中的磷酸鹽和氨鹽被迅速消耗,而硝酸鹽的利用稍慢,基於蔗糖、氨鹽和硝酸鹽的細胞收率係數分別為0.481、60和6.4 g/g,基於蔗糖的PeG收率係數為0.055 g/g[13]. 基於肉蓯蓉的保健特點，已採用沒有激素的培養基懸浮培養肉蓯蓉細胞，開發出肉蓯蓉系列功能飲料。培養時通過前體苯丙氨酸、酪氨酸飼餵來促進苯乙醇的生物合成，細胞乾重、苯乙醇苷、總黃酮和多醣的產量分別達18.5g/L、3.64、0.75和4.2g /L Dw,均比添加外源激素懸浮培養的肉蓯蓉細胞(HC)合成產量高[13]。國內目前已有2家單位完成了肉蓯蓉苯乙醇苷大規模生物反應器工廠化生產工藝和苯乙醇苷的分離提純研究，取得國家級科技成果，併申請了2項發明專利。把苯乙醇苷類化合物的含量提高到干細胞重的10%～20%[14-15]。

3懷槐異黃酮   懷槐Maackia amurensis Rupr. et Maxim.是我國珍貴的野生藥用植物，為豆科馬鞍樹屬落葉小喬木,《本草綱目》記載,具有祛風濕、消炎、鎮痛、健胃、止血等功效,民間用於治療肝臟疾病和膽囊炎,其藥用成分異黃酮（主要為芒柄花黃素、染料木素、大豆甙元等）具有顯著的保肝、抗腫瘤、抗氧化及防治骨質疏鬆等藥理活性[16]。在10 L氣升式生物反應器中進行了懷槐細胞懸浮試驗。獲得的最佳培養基組合是149.68 m g/L (NH)2SO4、2 936.10 m g/L
KNO3、0.01 mg/L 2,4-D和0.19 mg/L 6-BA,染料木素產率達到14.13
mg /L,比優化前提高18.09倍,是正交試驗優化的2.54倍[16]。也有研究認為適合異黃酮積累的最佳濃度組合為1 500 m g/L
KNO3、200 mg/L (NH4)2SO4和0.1 mg/L BA,細胞中異黃酮積累平均達到了19.3 mg/L,比優化前9.3倍[17]。硝酸鈰、硝酸鑭等稀土元素化合物,是懷槐培養細胞異黃酮合成的有效誘導子。水楊酸(SA)也是其有效誘導子，其最佳濃度為100 μmol／L[18]。茉莉酸甲酯（MeJA）、水楊酸（SA）和一氧化氮（NO）3種激發子對懷槐懸浮培養物異黃酮合成及細胞結構變化的影響研究表明，這些物質可使異黃酮合成量比對照提高317．18％、85、45％和122．45％[16]。

4石斛多醣

石斛多醣具有延緩衰老、增強免疫力、抗腫瘤、降血糖等多種藥理活性。2005年版《中國藥典》收載了金釵石斛、鐵皮石斛和馬鞭石斛3種。鐵皮石斛Dendrobium candidum Wall．ex Lindl為蘭科石斛屬多年生草本植物，是我國傳統的名貴中藥材，是石斛中的極品。具有益胃生津、滋陰清熱、潤肺止咳的功效。近年來， 培養鐵皮石斛原球 ​​莖是解決藥源不足的重要途徑。液體培養在生物量、多醣產量等方面均優於固體培養，表現在：原球莖在液體懸浮培養條件下，乾重量在50 d達到最大為17.64 g／L，多醣產量在40 d達到最大值為3,081.2 mg／L，在固體培養條件下，培養60
d乾重達到最大為13.40 g／L，多醣產量在40 d達到最大值為2,412.5 mg／L，分別比液體懸浮培養少4.24 g／L 、568.7 mg／L；從形態上看，固體培養的原球莖較綠，芽分化明顯，胚狀體弱小，液體懸浮培養的原球莖以黃色為主，稍有綠色，芽分化不明顯，胚狀體均勻、粗壯。表明通過液體懸浮培養生產鐵皮石斛原球 ​​莖具有較好的開發應用前景[19]。對鐵皮石斛原球 ​​莖與小菇屬真菌MF24(Mycena
sp.)誘導子的相互作用進行了系統研究，獲得了真菌誘導子在鐵皮石斛原球 ​​莖培養中的最佳工藝[20]。昆明高新五華科技園2005年開展稀藥用植物鐵皮石斛細胞培養物中多醣研究項目，每月製作和接種培養基可達8 000 L，可生產鐵皮石斛細胞400 kg。並開展鐵皮石斛細胞培養物中多醣分離、萃取及產業化研究[21]。

另外，對霍山石斛Dendrobium huoshanenses GZTang et SJCheng原球莖進行了生物反應器懸浮培養研究[22-23]。

霍山石斛試管開花研究
霍山石斛(Dendrobium
huoshanness)在自然條件下，從播種到開花需3年左右。研究霍山石斛的開花過程，縮短其開花年限；在理論上或是在應用上都具有重要意義。用組織培養方法研究誘導霍山石斛花芽發端並發育成開花植株，由於試管蘭花一年四季都有花蕾形成，這樣有助於進一步瞭解花的發育過程。本文研究了TDZ、BA、糖濃度、低溫15/ 5℃ (日/夜)、氮含量、轉瓶時間對霍山石斛組培苗花芽發生的影響。材料為4個月苗齡的組培苗和來自於4個月苗齡的組培苗的假鱗莖。篩選出誘導開花的適宜培養基後，定期取材(莖尖)，進行石蠟切片，試圖找出花芽分化的起始時間；使用HPLC測定植物中三種內源激素IAA、ABA、GA_3含量的變化；通過SDS-聚丙烯醯胺凝膠電泳進行蛋白組份分析。研究發現，在改良的MS基本培養基(1/6氮、5倍磷)，糖濃度提高到40g/L，並加入適宜濃度( 0.02m g/L)的TDZ可誘導霍山石斛小苗在2～5個月開花，5個月內統計誘導花芽發生率為50％左右。這種誘導提早開花現象，是發生在小苗基部新萌發的幼苗。花芽頂生，在葉腋間也有花發生。低濃度TDZ誘導的花芽多為頂生單花。高濃度TDZ誘導的花芽多為總狀花序。BA誘導霍山石斛開花率較低，而且小苗褐化嚴重。減少培養基中氮含量和低溫有利於霍山石斛花芽發生。由於所誘導的花芽正常開放率較低，嘗試著將小苗在誘導花芽發生的培養基中培養一段時間後，轉移到無激素的MS培養基中，發現大多花芽能正常開放。處理組為MS(1/6N，5P)+TDZ0.02，附加蔗糖40g/L，瓊脂8g/L，pH5.6～5.8。同時設置對照組：MS，附加蔗糖30g/L，瓊脂8g/L，pH5.6～5.8。通過製作石蠟切片，觀察到處理組在90天時葉腋間有花芽發生。處理組內源激素IAA含量在90～120d明顯減少，GA_3與誘導花芽發生關係不明顯，由於某種原因，未檢測到ABA。處理組在90～120d出現一特異蛋白。
http://www.lw23.com/lunwen_826401987/