三、不同營養系插穗發根之比較本試驗以信賢苗圃營養系園數種來源之營養系枝條進行扦插，以比較各營養系間的發根率、發根品質與新梢生長。(一)插穗來源本試驗於 2005 年11 月中旬採集林試所信賢苗圃內營養系(圖2)包括4 種源(台灣紅豆杉3 種源分別以D 代表中橫，W 為畢祿溪，Z 代表瑞岩及CH 代表中國紅豆杉)14 個營養系各1-7 株來源之枝條，剪取健壯長度10 -15c m 之枝穗供試驗之用。(二)插穗處理 在林業試驗所福山植物園的溫室內進行扦插，將插穗切口沾以3,000 ppm IBA 粉劑(圖3)，IBA 粉劑配法為將3 g 之IBA 充分溶於95 %酒精500cc，再加入1 kg 的滑石粉，以攪拌機攪拌均勻後，乾燥磨碎而成。插穗扦插於以蛭石#2：蛭石#3：泥炭土＝0.5：0.5：1(v/v/v) 的混合培養介質之84 孔穴盤(7×12)內，孔穴口徑×深度3.5 cm×8 cm，扦插深度以枝穗下端埋入介質內2~ 3 cm
為準，扦插完成後即開定時始噴霧(圖4 )，噴霧時間為間隔30 分鐘各噴30 秒，於12 月中旬改為間隔30 分鐘各噴8 秒，但實際供水情形仍需視氣候狀況彈性調整噴霧時間與間隔時間，以噴霧後苗木充分濕潤但無殘留水滴，並於手略施壓於介質時可感潮濕，且無多餘水分溢出為調整參考。扦插苗在發根調查完成後，於2006 年9 月18 日進行換盆，移植於以蛭石#2：泥炭土＝1：2(v/v) 的混合培養介質之3.5 吋的黑色軟盆內，移植完成後即開始噴霧，噴霧時間為間隔30 分鐘各噴15 秒，並漸漸減少供水量至間隔2 小時各噴15 秒，每株苗木並施以緩效性肥料好康多1 號(N：P：K=14：12：14，效用100 天) 15 顆，置於溫室內2 週後即移放於室外(圖5)。同年11 月22 日並將扦插發根率最高之3 營養系(D1, D5, D7)苗木各405 株，出栽礁溪實驗林場林道0.8 k 處，海拔約300 m 之地勢向陽坡面進行採穗園的栽植，營養系以單株逢機栽植，行距1 m，株距0.5 m，出栽8 個月後再隨機採集3 營養系(D1, D5, D7)之當年生、一年生的枝葉各2 g，重複四次，進行10-DAB 的分析。(三)試驗設計溫室內發根比較之試驗設置依完全逢機區集試驗設計(CompleteRandomized Block Design；CRD)，共用插穗：14 個營養系×84 孔穴盤(四)調查方法於 2005 年11 月16 日於溫室進行扦插後17 週起，每隔5 週分別觀察記錄其發根率、發根數、發根長度、側根率與新梢生長，發根數與發根長度以每週插穗的新發根數與發根長度個別計數，發根數指插穗根長2 mm 以上之數目，側根率為由不定根長出之側根比率(圖6)；新梢情形調查包括抽芽數、平均芽長(圖7)。調查進行至42 週為止。調查之進行，採逢機取樣法於每營養系內選取4~5 個穴盤，各穴盤再依系統取樣法自右往左對角線選取小苗10 株，扦插苗取出後用清水洗淨根系，計算根數與發根長度(主根)、側根率及抽芽數、平均芽長，再將插穗植回原穴盤內。(五) 10-DAB 成分的萃取將發根率最高之 3 營養系扦插苗出栽至林場8 個月後，於2007 年7 月隨機採集3 營養系之當年生、一年生枝葉各2 g，重複四次，進行10-DAB 的分析。本試驗之 10-DAB 分析乃引用何政坤等(2000)之方法，其步驟為：1、將不同營養系不同葉齡的葉片放入研缽內，加入液態氮研磨成粉末後再放入稱好重量的15 ml 離心管，以冷凍乾燥機乾燥一天。2、將兩倍體積量的甲醇(methanol, MeOH)加入已完全乾燥的樣品內，以震盪器震盪1 min 後再放入超音波震盪器中萃取1 hr，再用離心機4,500 rpm 離心5 min 後，取上清液於濃縮瓶中，剩餘粉末再用兩倍體積的MeOH 萃取一次，兩次萃取液合在一起。剩餘的粉末放入60 oC 烘箱中乾燥兩天以求得乾重，再以此乾重做為濃度計算基準。3、以真空減壓濃縮機(vacuum evaporator)在40 oC 中將萃取液濃縮乾燥後，再取1mL 的MeOH 將濃縮物溶解，以高效能液相層析儀(Waters 2695 Separations Model；HPLC)與光電二極體偵測器(Waters 2996 Photodiode Array Detector)偵測10-DAB 的濃度。4、分析方法是以自動取樣機(Autosampler, IS200, Perlin Elmer)取20μL針葉萃取液，經HPLC與分析管柱Lichrospher RP-18 (
particlesize: 5 μm, end capped, Merck Co.)，經光電二極體偵測器在230nm 的波長下偵測10-DAB 的濃度(定量的標準品購自SigmaCo.)。沖提溶液為20:38:42 MeOH:
ACN(acetonitrile):H2O，流速為1 mL/min。5、濃度算法為ng (HPLC 測定之濃度) ÷ 20 μL ×1 mL (樣品萃取液)÷ 萃取物乾重g ＝ ppm(六)統計分析每處理的發根率、側根率經反正弦角度(Arcsin)轉換為常態分配後(Eccher, 1988)進行統計分析。統計分析採用SAS (Satistical
AnalysisSystem)套裝軟體的GLM (general linear models)程式進行變異數分析(ANOVA)，如呈顯著，以最小顯著差異法(LSD, least significant difference)來檢定各營養系間台灣紅豆杉發根率、發根數、發根長度及側根率與抽芽數、平均芽長以及各營養系間不同葉齡之10-DAB 濃度的差異性(SASInstitute Inc. 2002)，顯著水準為5 %。二、扦插苗健化處理試驗本研究以限水與施肥的健化手段，藉以了解健化對苗木發根率、發根品質與新梢生長的影響。(一)扦插苗選取於 2006 年7 月1 日將試驗(一)中發根率超過50 % 之5 個營養系D4、D5、D6、D7 及Z8，除原本進行調查的5 個穴盤留置原地作為對照組外，將其餘苗木全數移至溫室內之健化區內進行試驗。(二)健化處理溫室健化區內的定時噴水系統減半為每 1 小時各噴8 秒，同時每苗木施以緩性肥料2 顆(好康多2 號，N：P：K=16：5：10，效用180 天)。同一溫室內不同苗床之對照區的噴水系統則為每30 分鐘各噴8 秒，且未施肥。(三)試驗設計試驗設置依完全逢機區集試驗設計，共用插穗：5 個營養系×84 孔穴盤=8,744 支(表2)(四)調查方法實驗進行前先分別觀察記錄其發根率(根長達到2 mm 以上始算發根)、發根數、發根長度、與新梢生長情形(調查方法同試驗一)，之後每隔5 週調查一次，調查進行至第10 週為止。(五)統計分析每處理的發根率、側根率經反正弦角度轉換後進行統計分析。統計分析採用SAS 套裝軟體的GLM 程式進行變異數分析，如呈顯著，以最小顯著差異法(LSD)來定各營養系間台灣紅豆杉健化與非健化苗木發根率、發根數、發根長度及側根率與抽芽數、平均芽長的差異性，顯著水準為5 %。三、採穗位與IBA 濃度對不同營養系插穗發根之影響本試驗以信賢苗圃營養系園數種來源之營養系的綠枝(Green shoot)與半木質化(Semi- lignified shoot)枝條，利用不同濃度的IBA 處理以促其發根，來比較各營養系間不同採穗部位與IBA 濃度對發根率、發根品質與新梢生長的影響。(一)插穗來源於 2006 年3 月3 日自林試所信賢苗圃之採穗園內採集4 種源(中橫D、南庄N、畢祿溪W、瑞岩Z)18 個營養系各有2-6 株來源之枝條，先在福山植物園溫室噴霧系統設備下保存至隔日。(二)插穗處理隔日修取長度為 10 -15 cm
之健壯綠枝與半木質化插穗，去除基部3cm 長度範圍的葉片，施以二種IBA 濃度粉劑1,000 ppm、3,000 ppm 及未處理插穗為控制組；綠枝為枝條上段含有頂梢之當年生插穗，枝條下段即為半木質化插穗(圖8)。插穗處理完後，即在福山植物園溫室內進行扦插，扦插於泥炭土：蛭石：珍珠石＝1：1：1.5(v/v/v)之混合培養介質的84 孔穴盤內，枝穗扦插深度與噴霧管理同試驗(一)之方法。(續五)
請先 登入 以發表留言。