摘要：鐵皮石斛傳統中藥,具有養胃生津，滋陰潤肺的功能由於其自然繁殖率低，生長條件要求苛刻，自然產量十分有限。由於其藥用價值昂貴，過度採挖，野生資源瀕臨滅絕。本研究採用組培苗繁育技術和仿生態技術，成功實現了鐵皮石斛人工繁育和田栽培,組培苗大田移植成活率在95％以上。大田栽三年，每畝約可收鮮石斛4 0 0-8 0 0公斤，其主要生物活性成分與野生鐵皮石斛相近。鐵皮石斛人工繁育與農田栽培技術的成功有效地挽救了瀕危珍稀物種，為保護生物樣性和鐵皮石斛可持續利用，創出了一條新途徑。
引言:
石斛(Dendrobium)是蘭科(Orchidaceae)植物，具有"補五臟虛勞嬴瘦，強陰，久服厚腸胃，輕身延年"的功效。早在宋代《名醫別錄》中記載"石斛生六安、山谷、水旁、石上"。後有《本草圖經》載稱"今荊州、充州、壽州、廬州、江州、溫州、台州亦有之，以廣南者為佳"。調查發現，在我國目石斛類植物共有70餘種，其中以鐵皮石斛（Dendrobium candidum）滋陰效果最好，藥用價值最高。然而，由於長期採挖，又因森林遭受破壞，生態環境惡化，鐵皮石斛資源幾乎近於枯竭而處於瀕臨滅絕的境地。國家第一批《中國珍稀瀕危保護植物名錄》中列為瀕危種類之一。本公司經過年的探索，終於掌握了鐵皮石斛組織培養快速繁殖技術，克服組培苗大田栽培難關，成活率幾乎達到95% 以上，栽培2-3年後即可獲得商品藥材。
材料和方法
1. 材料和培養條件
1.1試驗的材料：
採用天臺山野生鐵皮石斛植株和蒴果，用胚、莖尖和根尖作外植體。誘導原球莖為100ml的三角瓶作培養瓶，培養中苗到大苗都用罐頭瓶。基本培養基為改良MS。培養基I-IV的基本培養基為改良MS，四種培養基的不同在於微量元素和有機物的增減上的差異。
1.2培養條件：
培養室溫25℃±3℃，光照強度2000-4000LUX，每日照光10-12小時，分批上培養架進行培養。
2. 培養方法
2.1胚的培養
取鐵皮石斛蒴果用75％乙醇和0．1％氯化高汞表面滅菌。剖開蒴果，取其種胚並將之接種在改良的MS培養基上。誘導培養1月到2個月長出原球莖。將原球莖轉接到改良1／2MS+植物汁液的培養基上分化成小苗。小苗轉接到改良1／2MS+植物汁液的優化的培養基上，培養出壯苗。待苗高5-7cm時移栽至大田。
2.2莖尖培養
鐵皮石斛莖株，剪1cm的莖尖，剝去幼葉，同法表面滅菌。取莖尖0.2-0.3cm接種在誘導培養基I上，產生愈傷組織。將愈傷組織轉接到培養基II上，分化培養產生原球莖。將原球莖再轉接至培養基Ⅲ上增殖，最後轉接到培養基Ⅳ上分化成小苗。
2.3根尖培養
連根挖取鐵皮石斛植株，首先用軟刷在流水下將泥汙沖刷乾淨。剪取0.5cm 的根尖，同法表面滅菌。剝取根端0.2-0.3cm的根尖為外殖體，接種在誘導培養基I上誘導產生愈傷組織；隨之將愈傷組織相繼轉接在培養基II和培養基III上分別進行愈傷組織的繼代培養和誘導培養，產生原球莖。最後將原球莖接種在培養基IV上進行分化培養，分化出小苗。
3. 組培苗大面積農田栽培
3.1組培苗的出瓶處理
小心取壯苗，不要損傷拉斷根系。煉苗。洗淨附在根部的培養基，用1％高錳酸鉀溶液浸泡消毒，即可移入農田栽培。
3.2組培苗的移植
自行配製既保濕又通氣的混合物作為栽種基質，整地作畦。在畦上，用黑色遮蔭網架設網棚，保持其蔭蔽度在7 0-8 0％之間。將出瓶處理後的壯苗移栽到田畦上，株行距保持在20×25cm。移栽後，特別要保持基地空氣相對濕度在85％以上。
4. 田間管理
根據天臺山當地氣候特點、並遵循鐵皮石斛組培苗生長規律及時進行田間管理,原則如下：移栽的第一年主要是保濕，促進根系生長，提高成活率。移栽一年後，保濕加肥，促進苗生長和分枝。並注意病蟲害的防治。此外，要注意及時拔草、打苔、修整、及時剪去枯莖、病莖和生長過密的莖枝以促進萌發健壯的新莖枝。移栽後的第三年，剪枝採收，施肥促長新枝。
5. 收穫加工
鐵皮石斛組培苗通過農田栽培2-3年後開始採收。採收時用剪枝剪刀從莖基部剪下。剪割時，應收老留幼，剪大留小。將採收的鐵皮石斛剪成一定的長度，放在炭火上烘焙。邊搓揉邊乾燥，使成螺旋狀或彈簧狀，反復多次，直到不變形，即成傳統中藥--鐵皮楓鬥。
結果
採用組培苗技術，以天臺山野生鐵皮石斛莖尖，根尖，蒴果的胚作為外植體均可繁育出人工鐵皮石斛苗，其中以根尖作為外植體成苗週期最短，苗生長整齊、健壯，並且成本最低（見表1）。採用本研究配製的獨特栽種基質與技術，組培苗移植成活率在95％以上。大田栽種三年後，每畝約可收鮮石斛400-800公斤。經對本研究人工栽培的鐵皮石斛與野生鐵皮石斛主要生物活性成分石斛多糖、氨基酸、總生物鹼測定發現，人工栽培品與野生品相近（見表2）。此外，測定還發現，總氨基酸中具有明目功效成分谷氨酸、胱氨酸、甘氨酸，栽培品成分含量稍高於野生品。
表1 胚、莖尖和根尖不同來源的組培苗操作和特性的比較
不同外殖體\觀察專案無菌操作成苗的生長週期苗的生長狀況成本
生長速度整齊度長勢
胚容易 90天慢參差不齊壯中等
莖尖較難 80天中等參差不齊弱高
根尖難 70天快整齊健壯低
表2 組培苗農田栽培鐵皮石斛與野生鐵皮石斛主要化學成分比較
. 組培鐵皮石斛野生鐵皮石斛
總多糖(%) 17.3 21.8
總氨基酸(%) 5.09 4.53
總生物鹼(%) 0.015 0.0096
結論
鐵皮石斛為瀕危珍稀中藥材。本公司應用上述技術，以天臺山野生鐵皮石斛莖尖，根尖，蒴果的胚作為外植體均可繁育出人工鐵皮石斛苗，其中以根尖作為外植體成苗週期最短，苗生長整齊、健壯，並且成本最低。同時，通過仿生態技術，模擬野生鐵皮石斛自然生長條件，成功地配製出利於鐵皮石斛根系伸展、根系發達的人工生長基質，並營造出適於鐵皮石斛生長要求的濕度、溫度、蔭蔽度的環境。組培苗移植成活率在95％以上。大田栽種三年，每畝約可收鮮石斛4 0 0-8 0 0公斤，其主要生物活性成分與野生鐵皮石斛相近。鐵皮石斛人工繁育與農田栽培技術的成功有效地保挽救了這一瀕危物種，為保護生物多樣性和鐵皮石斛可持續利用，創出了一條新途徑。
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