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霍山石斛...........永豐餘生技
成功培育霍山石斛方法 !!!
石斛的離體培養及遺傳穩定性的分子檢測
石斛屬(Dendrobium S W．)是蘭科(Orchidaceae)多年生草本植物。在《本草綱目》中石斛被列為上品，具有明目強身、鎮痛消炎、抗腫瘤、抗衰老、增強機體免疫力等功效。本研究以金釵石斛為材料，在離體培養、遺傳穩定性兩領域開展了工作，以期為資源的離體保存、快繁等提供理論指導和構建技術平臺，現取得以下結果： 1 莖段離體培養技術的建立與優化 選用金釵石斛的嫩莖為外植體，用70％酒精浸泡30s後，分別用以下兩種方式滅菌，1)0.1％升汞滅菌12min，2)0.1％升汞+數滴Tween80滅菌10min；兩種滅菌方式的滅菌效果差別很大，污染率分別為73.3％、16.7％。隨後接種在MS+BA( 1.0m g／L)+NAA( 0.4m g／L)+蔗糖(3.0％)+瓊脂粉(0.7％)培養基上，萌發後轉接到MS+BA( 1.2m g／L)+NAA( 0.4m g／L)+蔗糖(3.0％)+瓊脂粉(0.7％)培養基上，通過器官型方式，誘導側芽的萌發增殖；壯苗培養以1／2MS+NAA( 0.5m g／L)+IBA( 0.5m g／L)+蔗糖(2.0％)+瓊脂粉(0.7％)培養基上效果最佳；生根培養以1／2...
石斛複方製劑的抗氧化和免疫功能的相關研究
通過應用石斛複方製劑對衰老家兔ＳＯＤ、ＬＰＯ的影響以及對小鼠自發性和ＣｏｎＡ刺激的脾淋巴細胞３Ｈ－ＴｄＲ摻入的作用實驗，結果表明該製劑不僅具有顯著升高衰老家兔的ＳＯＤ、降低ＬＰＯ的功能（Ｐ＜０．００１），而且具有顯著增強小鼠自發性和ＣｏｎＡ刺激的脾淋巴細胞３Ｈ－ＴｄＲ摻入的作用（Ｐ＜０．０２和Ｐ＜０．０１），即具有促進脾淋巴細胞增殖轉化的作用。且於ＣｏｎＡ刺激後，其療效高於西洋參陽性對照組（Ｐ＜０．０５）。該研究結果進一步證實了該製劑抗氧化功能和提高機體免疫功能是一致的。同時也提示了該製劑可能通過提高機體的免疫功能而起到抗氧化延緩衰老的功效。
石斛（ＤｅｎｄｒｏｂｉｕｍｎｏｂｉｌｅＬｉｎｄｌ．）為蘭科植物金釵石斛或其多種同屬植物的多年生常綠草本莖《神農本草經》將其列為上品 ; 味甘 , 微寒 , 無毒 , 入胃、腎經 ,具有益胃生津、滋陰清熱功效。我國約有石斛屬植物６３種 , 已作了顯微鑒定研究的有３４種
石斛複方製劑由石斛、黃芪、枸杞子、五味子等組成，具有滋陰，益氣，補腎的功效，動物實驗的研究表明，該製劑具有顯著的抗氧化和延長果蠅平均壽命的作用［1 ，2 ］；以及顯著提高小鼠自發性和ConA 刺激的脾淋巴細胞3H －Tdl ；摻入的作用［‘j 。為此，我們通過應用該製劑對衰老 醇提的石斛複方製劑抗氧化作用的實驗和臨床研究福建中醫學院現代醫學部（福州３５０００３）黃玲施紅石斛複方製劑由石斛、黃芪、枸杞和五味子組成，具有滋陰、益氣、補腎的作用。以往的研究表明，該製劑具有抗氧化、延緩衰老的功效［１］，為了有利於該藥的開發和應用
銅皮石斛水提液誘導HL-60 細胞凋亡的研究( 英)
目的: 探討銅皮石斛水提液的抗癌活性及其誘導急性白血病細胞凋亡的發生機制。方法: 運用MTT 方法檢測銅皮石斛對體外腫瘤細胞的細胞毒作用; 應用光鏡、電鏡, 瓊脂糖凝膠電泳、流式細胞儀和蛋白印跡免疫法觀察它誘導的HL-60 細胞的凋亡模式。結果:HL-60 細胞在銅皮石斛水提液作用下發生細胞凋亡, 凋亡細胞表現為細胞固縮、核染色質凝聚, 並出現凋亡小體。銅皮石斛水提液( 內含幹藥6.25mg/ml) 作用24 ～72h, 細胞DNA 裂解片段呈現典型的梯度條帶。凋亡抑制基因bcl-2 的表達在藥物( 6.25m g/ml) 作用6 ～12h 時增高,24h 後開始下降。結論: 銅皮石斛的抗癌活性與誘導細胞凋亡有關。
霍山石斛類原球莖懸浮培養細胞生長和多糖合成的動力學研究
霍山石斛是我國珍貴的藥用植物，產于安徽霍山及其鄰近地區，石斛多糖具有抗腫瘤、增強人體免疫等功效。由於霍山石斛在自然環境下生長緩慢，加上人工過度採集，其自然資源已瀕臨滅絕。目前對霍山石斛的研究主要集中在組織培養方面，但試管苗的脫瓶移栽問題尚未解決。霍山石斛類原球莖是霍山石斛的體細胞胚胎，具有和植株同樣的物質代謝和發育潛能。利用霍山石斛類原球莖懸浮培養生產活性多糖是解決霍山石斛資源短缺問題的有效途徑之一。本文對霍山石斛類原球莖懸浮培養過程進行了系統的動力學分析，並構建了動力學模型；考察了植酸和多胺對霍山石斛類原球莖細胞生長和多糖合成的影響；採用二步培養法對霍山石斛類原球莖合成多糖進行了研究；在10 L 氣升式反應器中進行了初步擴大培養。
不同培養條件下，霍山石斛類原球莖懸浮培養細胞生長曲線呈現較為典型的S型，低濃度時，蔗糖是細胞生長的限制性因素，提高蔗糖濃度可以明顯促進細胞生長，蔗糖濃度在30g ／L時，類原球莖生物量達到最大；但蔗糖濃度超過30 g ／L後對細胞生長具有抑制作用。硝酸鹽濃度為30 mmol／L時，有利於細胞生長，高濃度時對細胞生長有抑制作用。磷酸鹽是細胞生長的限制性因素，提高磷酸鹽濃...
鐵皮石斛多糖成分研究
石斛為我國傳統中藥材,其藥用價值為人們所共識。經研究發現,多糖是石 斛屬植物的主要活性成分。本文以石斛之上品-鐵皮石斛-為主要研究物件,首
次探討其不同部位主要化學成分及分佈規律,研究其多糖成分的提取、分離、純 化,以及主要組分的結構鑒定,比較了不同種石斛及不同生長方式鐵皮石斛的多 糖成分的差異,證實了石斛多糖的藥理活性,為石斛的生產與使用提供了依據, 並且為石斛多糖的構效關係的深入研究奠定了基礎。獲得的主要結果如下: 1.鐵皮石斛不同部位主要成分及分佈規律探討 鐵皮石斛莖的上、中、下三部分總多糖和水溶性多糖含量較高,3個部位之 間差異不大,根部含量很低,尤其是水溶性多糖,含量不足2%,只有莖部的13 %左右,說明傳統用藥上鐵皮石斛以莖為入藥部分在主要化學成分分析上是合理 的。鐵皮石斛各部分總生物鹼含量相差較大,莖部按上、中、下部依次降低,根 部又有所升高,僅次於莖上部;但總體含量較低,僅相當於金釵石斛含量的10 %,表明鐵皮石斛的藥用價值高於其他石斛屬植物很可能體現在多糖部分。 2.三種石斛多糖成分的比較研究
發現鐵皮石斛、細莖石斛和細...
瀕危名貴藥用霍山石斛類原球莖液體培養生產活性多糖的研究
石斛作為傳統名貴中草藥，其資源再生，化學成分和藥理活性逐漸引起人們的關注，多糖是石斛屬植物中主要的藥用活性成分之一。本文以傳統的名貴珍稀藥用植物——霍山石斛為主要研究物件，在建立霍山石斛類原球莖多糖高效表達懸浮培養體系的基礎上，利用生物大分子研究的最新技術和現代分離分析手段與藥理實驗方法，對霍山石斛類原球莖水溶性多糖進行了提取分離純化，並對其主要活性多糖組分HPS-1B23的組成和一級結構進行了研究。主要研究結果如下： (1) 以霍山石斛試管苗莖段為外植體，首次誘導獲得了類原球莖，並建立了類原球莖的培養體系。其中附加NAA(7.5μmol /L)和KIN(0.5μmol /L)組合的MS培養基最利於類原球莖的形成，誘導率達到79.9％。誘導的類原球莖經長期繼代培養後，從生長、植株再生、活性多糖合成、藥理作用、單糖組成及基因組DNA多態性等方面進行品質穩定性分析，表明誘導獲得的類原球莖系在品質上是穩定的。 (2)
藥理學研究證明瞭培養的類原球莖具有野生霍山石斛同樣的合成活性多糖的能力。野生霍山石斛總多糖能顯著促進小鼠脾細胞和巨噬細胞分別產生IFN-γ和TNF-α，...
密花石斛和景洪石斛離體克隆體對根再生作用研究
藥用石斛是珍稀的中草藥資源,具有抗白內障、防止血管硬化、清音利咽和生津益胃等的藥效,藥用歷史悠久。然而,由於人為因素及環境因素等的破壞,導致其資源頻臨滅絕。尋求保存野生資源並實現資源再生的有效途徑迫在眉睫,通過植物離體克隆技術獲得再生植株是解決這一問題的理想途徑之一。為此,本文主要對密花石斛、景洪石斛兩種藥用石斛離體克隆體系進行了研究,並考察了稀土元素對密花石斛根再生作用的影響。 植物激素是對植物的生長發育產生顯著的調節作用的生理活性物質。本實驗以MS為基本培養基,研究了植物激素IBA、NAA、IAA、BA和KT及其組合在密花石斛、景洪石斛的類原球莖(PLBs)誘導、莖再生和根再生的過程中的影響。結果表明:兩種石斛在光照((溫度(25±1)℃、每天光照16h,光照強度20001x)和暗培養(溫度(25±1)℃)條件下均能誘導出類原球莖。其中光照培養條件下,誘導密花石斛莖段外植體形成類原球莖的最佳激素組合是1.0mg/L
IBA+ 2.0m g/LBA,誘導率達到80.4%;而景洪石斛在1.0mg/L IBA+ 5.0m g/L BA激素組合下誘導率達到最高,為85.7%。暗培養條件下密花石斛和景洪石斛的最...
霍山石斛類原球莖二步法培養細胞生長和多糖合成的動力
磷是調控類原球莖細胞生長和多糖積累的有效因素。為了獲得較高的多糖產量, 根據霍山石斛類原球莖生長和多糖積累的動力學特性, 提出了二步培養方式, 採用了補料策略, 研究了其培養過程的動力學特性, 並建立了相關模型。結果表明, 採用二步法培養, 生物量從28 ·7gDW/L 提高到44 ·2gDW/L, 多糖產量從1 ·86g/L 提高到5 ·22g/L, 多糖含量從6 ·4% 提高到11 ·9% 。建立的模型基本反映了類原球莖生長和多糖積累的動力學機制。
中藥多糖降血糖研究進展
多糖是一類廣泛存在於自然界的生物大分子物質，參與生物體結構組成和多種生理功能。近２０多年來一系列傳統中藥的多糖成分被分離和純化，對其化學結構、理化性質、生理功能、藥理活性及作用機制等進行了多方面的研究。中藥多糖廣泛分佈於不同類別的中藥，如補益藥、活血化瘀藥、利水滲濕藥等，卻具有相似而又廣泛的生物活性。由於近年來糖尿病已居全世界發病率和病死率最高的五種作者簡介：劉超，男，２５歲，碩士研究生* 安徽中醫學院附屬針灸醫院疾病之一，多糖的降血糖作用尤其引人注意。本文對近年來國內外關注的中藥多糖的降血糖作用.
霍山石斛組培快繁技術研究
為提高霍山石斛的繁殖係數 , 對霍山石斛試管播種苗組培快繁技術進行了試驗研究。結果表明 : 不同的植物激素及其濃度組合、培養基中糖的含量、pH 值等因素對霍山石斛試管苗的生長及繼代增殖有很大的影響。其中 , 以MS 為基本培養基 , 添加植物激素KT
3m g/L 、2
,4-D 0 .2m g/L 、糖 3
% ,pH 值 5 .4, 對促進試管苗生長和繼代增殖的效果最佳 ; 而試管苗出瓶移栽的最佳基質為樹皮塊 , 其次為椰殼糠。
秋水仙素處理離體葉片獲得皇家蘋果四倍體植株
採用皇家嘎拉蘋果（Malus
domestica Borkh ．）離體新梢葉片作為外植體，研究了不同濃度的秋水仙素長時間處理（5 d ）誘導四倍體的效率。結果表明，以不定芽再生培養基附加25
mg ／L 秋水仙素效果最好，最高在36 ．7 ％的葉片外植體上獲得了四倍體植株。高濃度（75 ～200 mg ／L ）秋水仙素處理嚴重抑制組織的再生。採用流式細胞技術測定出誘變植株的細胞核DNA 含量比對照高出一倍，確定了植株為四倍體。四倍體植株不僅在遺傳上而且在外觀形態上也明顯區別於二倍體。四倍體植株已移栽於大田，並進行了嫁接育苗和大樹高接。
--------------------**永豐餘生技 成功培育霍山石斛**-------------------------------------
永豐餘生技斥資1.5 億元，歷經五年，在台灣、大陸兩地，以組織培養研發珍貴藥材「霍山石斛」量產，已獲豐碩成果。永豐餘昆山生技總經理何奕佳昨 (4)日宣布，年底將推出首批石斛保健產品，明年起在大陸展開契作量產，進軍兩岸及國際市場。何奕佳指出，霍山石斛與冬蟲夏草、天山雪蓮，並列為中國九大仙草，具有「清肝明目」功效。霍山石斛因產量稀少，1987 年被大陸列為國家瀕危植物，野生霍山石斛一律禁止交易。永豐餘生技歷經五年努力，以選種、組織培養開發出的霍山石斛，10 月獲中國大陸認證，成首家取得霍山石斛認證的業者，未來將開發為保健食品及眼科用藥。何奕佳表示，永豐餘1999 年參加農業生技國家型科技計畫，投入霍山石斛組織培養研究，今年能有如此成果，要歸功於產官學研能量的結合。為挹注研發支出，永豐餘目前也利用大陸昆山占地500 畝的實驗農場，生產80 種有機蔬果，外銷日本大型超市。何奕佳強調，永豐餘的霍山石斛選擇在大陸取得認證，除了原產地在大陸外，大陸也是全球中藥材的最大外銷產地。永豐餘生技透過育種、組織培養及藥效分析，目前已能確實掌握每一批石斛的藥效成分含量。被列為九大仙草之一的霍山石斛，因產量稀少，供不應求，價格昂貴，在迪化街批發市場 一台斤 大概2,000 元，百貨公司 一兩 則高達8,000 元，因此有「軟黃金」之稱。這項農業生技國家型計畫的分工，由陽明大學新藥研究中心主任吳榮燦，負責眼科用中藥霍山石斛的生物活性探討，農業試驗所負責品種收集、鑑定、育種，永豐餘生技則以組織培養技術，選取優良品系，進行溫室大量繁殖。國家型計畫藥用保健植物組總召集人、朝陽大學生物科技所教授蔡新聲表示，霍山石斛組織培養量產技術開發成功，是國內大規模產官學研合作的最佳範例。吳榮燦表示，霍山石斛是目前民間最名貴的眼科用藥，研究顯示，霍山石斛萃取物，對視網膜色素上皮細胞 (RPE)的生長、吞吃機能有抑制作用，也能促進肝生長因子，為「清肝明目」提供
相當的佐證。
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