霍山石斛試管開花研究
霍山石斛(Dendrobium
huoshanness)在自然條件下，從播種到開花需3年左右。研究霍山石斛的開花過程，縮短其開花年限；在理論上或是在應用上都具有重要意義。用組織培養方法研究誘導霍山石斛花芽發端並發育成開花植株，由於試管蘭花一年四季都有花蕾形成，這樣有助於進一步瞭解花的發育過程。本文研究了TDZ、BA、糖濃度、低溫15/ 5℃ (日/夜)、氮含量、轉瓶時間對霍山石斛組培苗花芽發生的影響。材料為4個月苗齡的組培苗和來自於4個月苗齡的組培苗的假鱗莖。篩選出誘導開花的適宜培養基後，定期取材(莖尖)，進行石蠟切片，試圖找出花芽分化的起始時間；使用HPLC測定植物中三種內源激素IAA、ABA、GA_3含量的變化；通過SDS-聚丙烯醯胺凝膠電泳進行蛋白組份分析。研究發現，在改良的MS基本培養基(1/6氮、5倍磷)，糖濃度提高到40g/L，並加入適宜濃度( 0.02m g/L)的TDZ可誘導霍山石斛小苗在2～5個月開花，5個月內統計誘導花芽發生率為50％左右。這種誘導提早開花現象，是發生在小苗基部新萌發的幼苗。花芽頂生，在葉腋間也有花發生。低濃度TDZ誘導的花芽多為頂生單花。高濃度TDZ誘導的花芽多為總狀花序。BA誘導霍山石斛開花率較低，而且小苗褐化嚴重。減少培養基中氮含量和低溫有利於霍山石斛花芽發生。由於所誘導的花芽正常開放率較低，嘗試著將小苗在誘導花芽發生的培養基中培養一段時間後，轉移到無激素的MS培養基中，發現大多花芽能正常開放。處理組為MS(1/6N，5P)+TDZ0.02，附加蔗糖40g/L，瓊脂8g/L，pH5.6～5.8。同時設置對照組：MS，附加蔗糖30g/L，瓊脂8g/L，pH5.6～5.8。通過製作石蠟切片，觀察到處理組在90天時葉腋間有花芽發生。處理組內源激素IAA含量在90～120d明顯減少，GA_3與誘導花芽發生關係不明顯，由於某種原因，未檢測到ABA。處理組在90～120d出現一特異蛋白。
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霍山石斛類原球莖液體培養及其保健功效的研究
Liquid Culture of
Protocorm-like Bodies from Dendrobium Huoshanense and Its Health Care Efficacy 2005-05-01
論文網
http://www.lw23.com/lunwen_971176197/霍山石斛;液體培養;快速增殖;多醣合成;培養基優化;保健功效Dendrobium
huoshanense; liquid culture; rapid proliferation; polysaccharide accumulation;
medium optimization; health care efficacy 霍山石斛(Dendrobium
Huoshanenses GZTang et SJCheng)是珍稀名貴中草藥,目前已經瀕危。為採用大規模反應器生產霍山石斛替代品,實現霍山石斛資源的可持續利用,本文對液體培養霍山石斛類原球莖快速增殖和多醣合成的條件進行了研究,並對類原球莖的保健功效進行了評價。1.液體條件下霍山石斛類原球莖最適宜的基本培養基強度是1/ 2M S;通過單因素和正交試驗,優化出類原球莖快速生長的增殖培養基是1/ 2M S+蔗糖30gL~(-1 )+馬鈴薯水提液100gL~(-1)+香蕉水提液30gL~(-1)+IBA 1.0m gL~(-1),該培養基可使類原球莖在40d內增殖12.56倍。2.葡萄糖和蔗糖對類原球莖生長與胞內多醣合成的實驗結果表明,培養基中添加蔗糖有利於多醣合成,類原球莖多醣積累的優化培養基是1/ 2M S+馬鈴薯水提液150gL~(
-1)+香蕉水提液30gL~(-1)+蔗糖30gL~(-1)+,此時類原球莖的多醣含量達9.78m-/g。對多醣合成與類原球莖生長採用Pearson相關分析,結果表明,二者是負相關的,相關係數為-0.845。3.實驗證明霍山石斛多醣具有明顯的緩解視疲勞和增強免疫低下小鼠的機體免疫功能。霍山石斛類原球莖與茶葉按照7∶3(w/w)比例配製的保健飲品,不僅可使小鼠眼球和血清SOD活力分別提高1.64倍和1.47倍,而且能有效提高免疫低下小鼠的免疫器官指數,與環磷醯胺組比較,該飲品可分別使小鼠脾臟指數提高21.6%、胸腺指數提高79%。
激素、培養方式與條件對鐵皮石斛類原球莖有效成分影響的研究
2002-06-01 論文網 http://www.lw23.com/lunwen_380593762/蝴蝶蘭;溫度;毛細管電泳;GA_3;DDRT-PCRpeanut;Aspergillusflavus;MJ;AFB_1;PI;PAL;endochitinase;exochitinase;β-1,3-glucanase;LOX-1;LOX-3
本實驗從野生金釵石斛莖中提取了石斛鹼；探討了鐵皮石斛類原球莖生長與有效成分積累的關係；研究了不同培養方式(固體培養和液體靜置培養)、不同培養條件(光培養和暗培養)以及不同濃度的MJ和ABA對鐵皮石斛類原球莖生長和有效成分積累的影響。結果如下：從薄板層析和氣質聯機的結果來看，從金釵石斛的莖中提出的結晶為石斛鹼，純度達96.558％。固體培養基上培養的鐵皮石斛PLBs生長曲線大致呈“S”形，延遲期為二十天，對數增長期為三十天，培養五十天后進入穩定期。在培養的六十天內，PLBs中總生物鹼和多醣積累均隨著PLBs生物量的增加而增加，培養五十天后，兩種有效成分的含量達到最大值，之後含量都有所下降。液體靜置培養的鐵皮石PLBs生長曲線大致也呈“S”形，但比固體培養增殖更為迅速，也更適宜於總生物鹼積和多醣的積累。在黑暗條件下，液體靜置培養的鐵皮石斛PLBs的生長曲線大致辭也呈“S”形，但與照光培養相比，增殖速度慢，生物鹼的含量有所增加，多醣的積累大幅度降低。摘公總的來說，黑暗不適宜以獲得有效成分為目的的PLBS培養。但是經過照光培養後的PLBs呈淡黃色，分散性較好。MJ和ABA均可不同程度的抑制PLBS的生長和提高有效成分的積累。從本實驗的結果來看：MJ25 11mol／L和10 n
mol／L；ABAO二sing／L和cling／L對PLBs的生長影響較小，且能較大幅度的提高總生物鹼和石斜多醣的積累。
霍山石斛類原球莖懸浮培養細胞生長和多糖合成的動力學研究
2006-12-01 論文擴展功能http://www.lw23.com/lunwen_826401987/
霍山石斛原球 莖類機構;懸浮培養;多醣;動力學;結構模型;氣升 大號gas-升速式反應器大全-宜配網進行了初步擴大培養。g / L的後對細胞生長具有抑製作用。硝酸鹽濃度為30 DW / L的。DW / L時，多醣產量為2.20克/升。mmol / L的，第二步培養磷酸鹽濃度為0.312 進行了霍山石斛類原球莖懸浮培養的初步放大試驗，通氣量在0.5 DW / L時，多醣產量提高到8.15克/ L，在安徽省霍山縣，霍山石斛，珍貴的野生藥用植物，在中國銷售。從石斛中分離的多醣能抑制腫瘤細胞的生長，並具有免疫活性。因為在霍山石斛和過度採集野生源的不足，它已經瀕臨滅絕。組織培養技術已被用於在體外霍山石斛的質量乘法，但文化系統還沒有被證明是更有效。球莖類機構（公共小巴）其實體可從石斛的外植體誘導產生一些活性物質的胚胎。霍山石斛原球
莖狀體培養的活性多醣生產的一個可行的替代已被視為一種新的方法。一個結構的動力學模型來描述的栽培過程中。此外，植酸和多胺對兩個階段的培養和基本比例尺小巴在10 L 氣升式生物反應器懸浮培養細胞生長和多醣的合成，調節細胞生長和多醣合成的影響進行了調查。小巴懸浮培養細胞生長，多醣合成和營養物質的消耗動力學分析。小巴的懸浮培養過程可分為三個階段：滯後期，快速增長階段，不同條件下的固定相。蔗糖是低濃度條件下生長的限制營養。蔗糖濃度的增加，刺激細胞生長和最後小巴收穫增加。在30 g / L的蔗糖給小巴的最高量。當濃度高於30 g / L的底物抑制觀察 在30 mmol / L的硝酸是有利於細胞的生長。磷是細胞生長的限制因素。磷酸鹽濃度增加，增加了細胞的生長率，縮短了培養週期。共有2.5 mmol / L的培養基磷酸給生物量最高（28.7克DW / L的）。在不同的條件下，多醣產量的變化趨勢是相同的。蔗糖濃度增加，在一定程度上能提高多醣生產，蔗糖濃度較高，而抑制多醣生產。在30 mmol / L的硝酸鹽，有利於多醣積累。初始磷酸鹽濃度是最有效的多醣積累。可以得到最大的多醣生產（2.46克/ L），在0.312 mmol / L磷酸鹽濃度。多醣的積累不僅與細胞的生長，但也與細胞內降低血糖水準密切相關。小巴前吸收迅速水解外蔗糖。水解過程中可以使用基板飽和動力學方程來描述。在同一時間被吸收的葡萄糖和果糖。內還原糖積累是密切相關的培養基組成。蔗糖的生物產量不同的培養條件下的係數是不同的。在中期的初始磷酸鹽濃度有關的細胞內磷酸積累水準。胞磷水準影響細胞的生長，多醣和積累。結構模型被開發。整個文化系統分為生物相和非生物相。前者被分為4個艙室：還原糖，中間代謝產物，產品和呼吸損失。後來包括蔗糖，還原糖。計算結果與實驗數據相吻合。該模型可用於種植過程中的描述。輔以植酸2.5g / L的培養基有利於細胞生長和多醣合成。細胞幹重和多醣生產德國之聲29.4克/ L和2.06克/ L的分別。植酸能抑制過氧化物酶和多酚的活動。腐胺和精胺在0.6mmol / L，提高細胞內的多胺含量，刺激細胞生長和多醣生產。德國之聲32.6克/ L和2.20克/ L，分別生產的生物量和多醣。磷酸鹽是一種調節細胞生長和多醣積累的有效因素。兩個階段的種植可用於生產多醣。第一步，在一個中等增長的小巴2.5 mmol / L磷酸鹽和在第二步中，他們成長在一個中等0.312毫摩爾/ 1磷酸鹽。由兩個階段的培養，多醣生產和含量達到5.22克/升和11.9％，分別為，均高於其他方法。該模型可以描述兩個階段的培養過程。基本比例尺小巴在10 L 氣升式生物反應器懸浮培養進行了研究。曝氣率為0.5 L / min的有利於細胞生長和多醣合成。最大的生物量和總多醣在生物反應器生產的分別為86.5％和145％，分別比瓶培養。在生物反應器細胞生長和多醣積累的動力學瓶培養。營養物質的消耗速度要慢得多，低於在燒瓶文化，利用率。生物量（44.7 g 幹重/ L），和多醣產量（8.15克/升），獲得了由餵養文化。
霍山石斛類原球莖液體培養及其保健功效的研究
霍山石斛(Dendrobium
Huoshanenses GZTang et SJCheng)是珍稀名貴中草藥,目前已經瀕危。為採用大規模反應器生產霍山石斛替代品,實現霍山石斛資源的可持續利用,本文對液體培養霍山石斛類原球莖快速增殖和多醣合成的條件進行了研究,並對類原球莖的保健功效進行了評價。1.液體條件下霍山石斛類原球莖最適宜的基本培養基強度是1/ 2M S;通過單因素和正交試驗,優化出類原球莖快速生長的增殖培養基是1/ 2M S+蔗糖30gL~(-1 )+馬鈴薯水提液100gL~(-1)+香蕉水提液30gL~(-1)+IBA 1.0m gL~(-1),該培養基可使類原球莖在40d內增殖12.56倍。2.葡萄糖和蔗糖對類原球莖生長與胞內多醣合成的實驗結果表明,培養基中添加蔗糖有利於多醣合成,類原球莖多醣積累的優化培養基是1/ 2M S+馬鈴薯水提液150gL~( -1)+香蕉水提液30gL~(-1)+蔗糖30gL~(-1)+,此時類原球莖的多醣含量達9.78m-/g。對多醣合成與類原球莖生長採用Pearson相關分析,結果表明,二者是負相關的,相關係數為-0.845。3.實驗證明霍山石斛多醣具有明顯的緩解視疲勞和增強免疫低下小鼠的機體免疫功能。霍山石斛類原球莖與茶葉按照7∶3(w/w)比例配製的保健飲品,不僅可使小鼠眼球和血清SOD活力分別提高1.64倍和1.47倍,而且能有效提高免疫低下小鼠的免疫器官指數,與環磷醯胺組比較,該飲品可分別使小鼠脾臟指數提高21.6%、胸腺指數提高79%。
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霍山石斛快速繁殖及其次生代謝物含量的調控研究2007-06-01 論文擴展功能網 http://www.lw23.com/lunwen_409536097/
霍山石斛;快繁體系;生理指標;霍山石斛多醣; ;
dendrobine;;
1/2MS +0.2 mg / LKT的+0.2毫克/
LNAA +0.3 mg/L6-BA。
通過不僅對霍山石斛快速繁殖系統的研究，而且還分析研究次生代謝產物的監管，霍山石斛的主要結果如下：1，這四個因素（MS ,6-BA，KT公司進行了文本霍山石斛叢生芽的誘導，NAA）的選擇，每個因素有levels.Through正交設計，研究，結果表明，四個因素的訂單影響是霍山石斛叢生芽誘導：KT>基本培養基> 6-BA> NAA，其中，KT的霍山石斛叢生芽誘導的影響是非常顯著，但基本培養基,6-BA，NAA的是他的最佳培養基not.The霍山石斛叢生芽的誘導，篩選出的，它是：1/2MS +0.2 mg / LKT的+0.2毫克/ LNAA +0.3 mg/L6-BA 2，中等1/2MS +0.2 mg / LKT的0.2毫克/ LNAA +0.3 mg/L6-BA作為對照，我們增加了單獨土豆泥，香蕉泥，蘿蔔色度也was 100g /
L時，200克/ L時，300克/ L和硝酸鑭濃度為10mg / L，為20mg
/ L，為40mg / L的文化的石斛huoshanense.The結果表明，不同的添加劑對石斛huoshane NSE增長一些促進作用，特別是與馬鈴薯泥和硝酸鑭，它已顯著discrepancy.At同時，相關生理指標的分析，葉綠素濃度帳篷可充當重要霍山石斛qualitical的苗木早期選擇的生理指標。3，MS培養基作為對照，我們分別IBA的（達0.5mg
/ L，1.0mg / L時，附加2.0mg / L），萘乙酸（達0.5mg / L，1.0mg / L時，附加2.0mg / L）和香蕉泥（ 10％，20％，40％）使用生根文化。結果表明，20％的香蕉泥加入時，它是霍山石斛生根效果最好。4，1/2MS +0.2 mg / LKT的+0.2毫克/ LNAA +0.3 mg/L6-BA培養基作為對照，我們分別添加L -賴氨酸（達0.5mg / L，12.5mg
/ L，每公升2.5毫克/ L）， SYS（0.2mg / L的，為1.0mg
/ L時，一級5.0mg / L）和硝酸鑭（10mg / L時，為20mg / L，40mg / L時）控制有關石斛huoshanense.The結果多醣的研究表明，L-賴氨酸（每公升2.5毫克/ L）和硝酸鑭（20mg /
L的）在一定濃度範圍內每提高顯然在霍山石斛多醣，它有顯著差異，但系統只discrepancy.At同時，我們進行了初步研究霍山石斛多醣清除DPPH自由基，有機遊離基發現，霍山石斛polysacchari-DES清除活動。5，1/2MS +0.2 mg / LKT的+0.2毫克/ LNAA +0.3 mg/L6-BA培養基作為對照，我們分別添加L -賴氨酸（達0.5mg / L，12.5mg
/ L，每公升2.5毫克/ L）， SYS（0.2mg / L的，為1.0mg
/ L時，一級5.0mg / L）和硝酸鑭（10mg / L時，為20mg / L，40mg / L時）控制的研究bibenzyls關於dendrobine和moscatilin，usingHPLC /紫外線來確定含量的- ţ後援結果表明，L -賴氨酸和sys
moscatilin內容的促進作用; L -賴氨酸（12.5mg
/ L），系統（0.5mg / L的），可以大大提高在一定濃度範圍內每個Moscatilin。
鐵皮石斛的快速繁殖及其次生代謝產物的研究
Dendrobium
officinale Kimura et Migo.; Protocorm like bodies; Rapid propagation; Secondary
metabolites
本試驗探討了基本培養基、植物生長調節劑、培養條件、接種方式、碳源等因素對鐵皮石斛擬原球莖的誘導和增殖、分化培養的影響以及培養基成分、培養條件等對擬原球莖中的藥用有效成分，如石斛多醣、總生物鹼等的積累的影響進行了研究，研究結果如下： 1．通過比較MS、LS、B_5、N_6、H、Nitsch、White和WPM8種基本培養基對鐵皮石斛擬原球莖的誘導、增殖、分化和試管苗壯苗生根的影響，發現N_6培養基適合於鐵皮石斛擬原球莖誘導和增殖，B_5培養基適合擬原球莖的分化培養和試管苗的壯苗生根。2．2，4-D、NAA和IBA三種生長素均可誘導出擬原球莖，誘導率都在65％以上，其中以0.5 mg/L2，4-D，0.5-1.0 mg/L NAA， 1.0mg／L IBA效果最好。2，4-D和6-BA，以及2，4-D和KT結合使用均不利於擬原球莖誘導和增殖。1.0mg/LNAA+0.3-0.5
mg/L6-BA、1.0mg／L IBA+0.5
mg/L6-BA誘導出的擬原球莖生長旺盛，富有光澤，有利於進一步繼代培養。在誘導擬原球莖的分化培養中，單獨使用NAA時，以0.5 mg/L效果最好。如果把NAA與細胞分裂素配合使用，以0.5mg／L NAA+0.5mg/L6-BA的組合最有利於擬原球莖的分化，並且擬原球莖生長量明顯大於單獨使用NAA時的生長量。高濃度NAA和高濃度的6-BA配合使用則會對擬原球莖的分化產生抑製作用。在試管苗壯苗生根培養中，單獨使用IBA時，以1.0 mg/L效果最好。如果把IBA與NAA配合使用，以0.3mg/L
NAA+1.0mg/L6-BA的組合最有利於試管苗的壯苗和生根。3．擬原球莖誘導和增殖pH值以5.8比較適宜；培養過程中的光照條件以12h光照加12h黑暗有利於擬原球莖誘導和增殖；接種時將長度為0.7cm 的莖段橫放時誘導效果最好。4．碳源對比表明，分析純的蔗糖比葡萄糖和市售普通白糖更有利於擬原球莖誘導和增殖。當蔗糖濃度為40mg／L時不僅有利於擬原球莖的增長，也有利於石斛多醣的積累。5．系統研究了B_5培養基中大量元素、微量元素、蔗糖濃度對鐵皮石斛試管
霍山石斛快速繁殖及其次生代謝物含量的調控研究2007-06-01 論文擴展功能網 http://www.lw23.com/lunwen_409536097/
霍山石斛;快繁體系;生理指標;霍山石斛多醣; ;
dendrobine;; \1/2MS +0.2 mg / LKT的+0.2毫克/ LNAA +0.3 mg/L6-BA。通過不僅對霍山石斛快速繁殖系統的研究，而且還分析研究次生代謝產物的監管，霍山石斛的主要結果如下：1，這四個因素（MS ,6-BA，KT公司進行了文本霍山石斛叢生芽的誘導，NAA）的選擇，每個因素有levels.Through正交設計，研究，結果表明，四個因素的訂單影響是霍山石斛叢生芽誘導：KT>基本培養基> 6-BA> NAA，其中，KT的霍山石斛叢生芽誘導的影響是非常顯著，但基本培養基,6-BA，NAA的是他的最佳培養基not.The霍山石斛叢生芽的誘導，篩選出的，它是：1/2MS +0.2 mg / LKT的+0.2毫克/ LNAA +0.3 mg/L6-BA 2，中等1/2MS +0.2 mg / LKT的0.2毫克/ LNAA +0.3 mg/L6-BA作為對照，我們增加了單獨土豆泥，香蕉泥，蘿蔔色度也was 100g /
L時，200克/ L時，300克/ L和硝酸鑭濃度為10mg / L，為20mg
/ L，為40mg / L的文化的石斛huoshanense.The結果表明，不同的添加劑對石斛huoshane NSE增長一些促進作用，特別是與馬鈴薯泥和硝酸鑭，它已顯著discrepancy.At同時，相關生理指標的分析，葉綠素濃度帳篷可充當重要霍山石斛qualitical的苗木早期選擇的生理指標。3，MS培養基作為對照，我們分別IBA的（達0.5mg
/ L，1.0mg / L時，附加2.0mg / L），萘乙酸（達0.5mg / L，1.0mg / L時，附加2.0mg / L）和香蕉泥（ 10％，20％，40％）使用生根文化。結果表明，20％的香蕉泥加入時，它是霍山石斛生根效果最好。4，1/2MS +0.2 mg / LKT的+0.2毫克/ LNAA +0.3 mg/L6-BA培養基作為對照，我們分別添加L -賴氨酸（達0.5mg / L，12.5mg
/ L，每公升2.5毫克/ L）， SYS（0.2mg / L的，為1.0mg
/ L時，一級5.0mg / L）和硝酸鑭（10mg / L時，為20mg / L，40mg / L時）控制有關石斛huoshanense.The結果多醣的研究表明，L-賴氨酸（每公升2.5毫克/ L）和硝酸鑭（20mg /
L的）在一定濃度範圍內每提高顯然在霍山石斛多醣，它有顯著差異，但系統只discrepancy.At同時，我們進行了初步研究霍山石斛多醣清除DPPH自由基，有機遊離基發現，霍山石斛polysacchari-DES清除活動。5，1/2MS +0.2 mg / LKT的+0.2毫克/ LNAA +0.3 mg/L6-BA培養基作為對照，我們分別添加L -賴氨酸（達0.5mg / L，12.5mg
/ L，每公升2.5毫克/ L）， SYS（0.2mg / L的，為1.0mg
/ L時，一級5.0mg / L）和硝酸鑭（10mg / L時，為20mg / L，40mg / L時）控制的研究bibenzyls關於dendrobine和moscatilin，usingHPLC /紫外線來確定含量的- ţ後援結果表明，L -賴氨酸和sys
moscatilin內容的促進作用; L -賴氨酸（12.5mg
/ L），系統（0.5mg / L的），可以大大提高在一定濃度範圍內每個Moscatilin。
鐵皮石斛原球莖多醣的誘導、提純、理化性質及生物活性研
2007-05-01 論文網
http://www.lw23.com/lunwen_766538937/
Dendrobium candidum;; Protocorm; ; Polysaccharide;; Isolation and purification;;
Physicochemical properties;; Biological activity
多醣是石斛的主要藥用成分。現代藥理學研究表明，石斛多醣具有延緩衰老、增強免疫力、抗腫瘤、降血糖等多種藥理活性。鐵皮石斛(Dendrobium candidum Wall．ex Lindl)是石斛中的極品，具有益胃生津、滋陰清熱、潤肺止咳的功效。近年來，由於過度消耗，石斛野生資源已瀕臨絕跡。由此，提出鐵皮石斛胚性組織原球莖(protocorm)替代其原植株成為藥源的可能性。但迄今有關鐵皮石斛原球 莖多醣的研究尚未見報導。本研究旨在優化鐵皮石斛原球 莖生長和多醣積累的培養條件，了解鐵皮石斛原球
莖多醣的理化性質和生物活性。研究結果如下： 1．鐵皮石斛原球 莖懸浮培養誘導高含量多醣的研究(1)鐵皮石斛原球 莖生長、多醣積累以及營養物消耗的動態變化為篩選適合鐵皮石斛原球
莖的最佳培養方式，對比了固體培養和液體懸浮培養這兩種培養方式，並研究了液體懸浮培養基質的營養消耗趨勢，同時分析了液體培養液中pH值和電導率的變化。結果表明：原球莖在固體培養條件下，培養60d後乾重達到最大為13.40g ／L，多醣產量最大值為2412.5mg／L，在液體懸浮培養條件下，乾重需要50d達到最大為17.64g ／L，多醣產量最大值為3081.2mg／L，液體懸浮培養在乾重量、多醣含量和多醣產量等方面優於固體培養。在70d的周期內，懸浮培養原球莖以近“S”型曲線生長；原球莖在培養初期生長較緩慢，培養10d後原球莖生長進入快速生長期，原球莖乾重量在第50d有最大值( 17.64 g ／L)，隨後下降，60d後原球莖開始衰亡。多醣的積累與原球莖生長有一定的相關性，多醣含量從10d起開始逐步增長，30d達到最大(213.5mg／g·DW)，而後迅速降低。在懸浮培養過程中，糖和磷的消耗速度較快，銨態氮優於硝態氮被吸收利用；pH值在培養前10d快速下降，隨後又逐漸回升；在指數生長期，培養基中電導率降低與原球莖乾重量增加之間有線性負相關性。(2)不同因子對鐵皮石斛原球 莖生長和多醣積累的影響MS、1／2MS、B5、N6和White培養基對原球莖的生長和多醣積累有不同的影響。其中，1／2MS和N6培養基適合原球莖生長和多醣積累。氮源濃度為30～60mmol／L，NO_3~—／Ha_4~+摩爾比為40∶20，30∶30時有利於原球莖生長和多醣積累。通過二次回歸正交組合設計，優化擬合得到了激素6-BA和NAA的正交回歸模型，通過尋優定量表明6-BA為1.25mg／L，NAA為0.52mg／L時，原球莖最大干重量可達14.68g ／L；當6-BA與NAA組合的最佳濃度配比為1.41mg／L，0.36mg／L時，原球莖最高多醣含量為274.2mg／g·DW。在以轉速、接種量、和pH三因素四水平的L_(16)(4~3)正交試驗中，對原球莖生長影響最大的因子是pH，其次是轉速，接種量最小。初始培養液pH為pH 7.0，搖床轉速為110r／min，接種量為30g·FW／L適合原球莖生長；各因子對原球莖多醣積累的影響程度依次為轉速、pH、接種量。初始培養液pH為5.0，搖床轉速為110r／min，接種量為50g·FW／L有利於多醣積累。在葡萄糖，果糖，蔗糖和乳糖4種碳源中，蔗糖和葡萄糖對原球莖生長和多醣積累的影響優於乳糖和果糖。鐵皮石斛原球
莖生長和多醣積累所需的最佳蔗糖濃度不同。在蔗糖濃度為30～60g ／L範圍內，濃度越高，原球莖生長受到抑制越大，但多醣含量增加越快，含量越高；而蔗糖濃度高於60g ／L時，蔗糖則呈現出明顯的抑製作用，抑制了原球莖的生長，降低了乾重量，但誘導了保護酶SOD的合成。當蔗糖濃度為30g ／L時，該濃度適合原球莖的生長和多醣積累，最大干重量為17.93g ／L，多醣最高含量為208.7mg／g·DW，培養40d時，其產量為3679.6mg／ L。(3)不同來源鐵皮石斛材料多醣和氨基酸含量的分析野生鐵皮石斛莖中的多醣含量隨年份不同含量差異較大，多年生莖中的多醣含量最高；莖、葉、根三個部位多醣含量不同，其高低順序依次為莖＞葉＞根。鐵皮石斛原球
莖與野生植株莖中的多醣和總氨基酸含量相當，二者均含有7種人體必需的氨基酸，其中以野生鐵皮石斛一年生莖中的含量最高，懸浮培養的原球莖含量次之，而野生鐵皮石斛多年生莖的含量最低。初步顯示組織培養物原球莖能彌補鐵皮石斛野生資源的短缺。2．正交設計優化鐵皮石斛原球 莖多醣提取條件採用正交設計研究了原球莖多醣提取的條件，確立了Sevag法除蛋白的條件和不同的除蛋白方法。優化的多醣提取條件為：溫度80℃ ，浸提2h，加20倍水，重提3次。Sevag法除蛋白的最適條件為：氯仿與正丁醇(v／v)的體積比為5∶2，粗多醣溶液與氯仿+正丁醇(v／v)的體積比為1∶ 0.35，反應時間為5min。交替應用木瓜蛋白酶法與Sevag法的除蛋白效果優於單獨採用的Sevag法。3．鐵皮石斛原球 莖多醣分離、純化及理化性質從鐵皮石斛原球 莖中提取，經醇沉、去蛋白質後得到的粗多醣(DCPP)，分別上陰離子交換纖維素柱(DEAE-52)和凝膠柱(Sephadex G-200)依次層析，分離純化得2個灰色的主要多醣組分DCPP 1a -1和DCPP 3c -1，DCPP 1a -1和DCPP 3c -1均為均一性多醣組分，分子量分別為189.0 kD、 72.4 kD。DCPP 1a -1由甘露糖和葡萄糖按7.015∶1的摩爾比組成，分子中1→6殘基，1→2或1→4殘基，1→3殘基所佔的比例分別為4.0％，52.1
％和44.9％；DCPP 3c -1由甘露糖、鼠李糖、半乳醣醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖組成，相對應的摩爾比為1.1204∶1∶1.046∶23.054∶3.828∶1.046，其分子中1→6殘基佔14％，1→2或1→4殘基佔40.7％，1→3殘基佔45.3％。兩者的紅外光譜顯示有典型的多醣特徵吸收峰，並存在α- 吡喃糖苷鍵。多醣DCPP 1a -1和DCPP 3c -1是首次從鐵皮石斛原球
莖中分離純化得到的兩種新型組分。4．鐵皮石斛原球 莖多醣體外對氧自由基和脂質過氧化的影響鐵皮石斛原球 莖多醣具有較強的體外抗氧活性。粗多醣DCPP和2種純多醣(DCPP 1a -1、DCPP 3c -1)在體外均能顯著地清除·OH和O_2~-。多醣DCPP、DCPP 1a -1和DCPP 3c -1對·OH清除作用呈現較好的量效關係，抑制率達50％的濃度(IC_(50))分別為0.982mg／mL、1.181mg／mL和0.930mg ／mL；DCPP和DCPP 1a -1清除O_2~-的IC_(50)分別為0.619mg／mL、0.727mg／mL；DCPP 3c -1在濃度為0.615mg／mL時，O_2~-有較強的清除效率，而後隨著濃度的增大，清除率呈下降趨勢；3種多醣均能有效地抑制肝組織自發性氧化和Fe~(2+)、H_2O_2誘導過氧化脂質的生成，以及小鼠肝線粒體的脂質過氧化物MDA的產生。3種多醣能減輕·OH所致的肝線粒體腫脹度，其抑制效果與濃度呈劑量效應關係。5．鐵皮石斛原球 莖多醣體內抗腫瘤粗多醣(DCPP)和純多醣(DCPP 1a -1)分別以低、中、高劑量按50mg／kg、150mg／kg、250mg／kg三個劑量對小鼠灌胃給藥10d，二者對H_(22)肝癌小鼠均有不同程度的抑瘤作用。粗多醣DCPP的低、中、高三個劑量組對H_(22)肝癌小鼠的抑瘤率分別為22.6％、37.0％和14.9％，不存在劑量效應，中劑量組(150mg／kg)的抑瘤效果最好(p＜0.01)；DCPP 1a -1對H_(22)肝癌小鼠的抑瘤率為15.7％～28.6％，抑瘤率與劑量呈負相關，其中低劑量組能顯著抑制腫瘤的生長(p＜0.05)，抑瘤率達到了28.6％。原球莖多醣能提高腫瘤小鼠胸腺指數和脾指數，在低劑量下胸腺指數和脾指數增加效果顯著(p＜0.05)，高劑量組的效果反而降低，但仍高於腫瘤對照組。多醣DCPP和DCPP 1a -1在中劑量下，能顯著提高小鼠血清中的SOD活性，降低MDA含量(p＜0.05)。原球莖多醣通過提高機體免疫功能和抗氧化能力，抑制了腫瘤的生長。本研究初步顯示出離體培養的鐵皮石斛原球
莖可以為石斛多醣的開發提供新的藥源。
細莖石斛的組織培養和提高擬原球莖有效成份含量的研究2003-06-01 論文網
http://www.lw23.com/lunwen_400707292/細莖石斛;組織培養;擬原球莖;有效成分
Dendrobium moniliforme ;tissue culture;Protocorm-like bodies;effective
compoments
本論文對細莖石斛的組織培養和不同因素對細莖石斛擬原球莖有效成分的影響進行了研究，結果如下：細莖石斛種子在MS不含激素的培養基上有較高的萌發率。種子萌發後形成的原球莖保持階段十分短暫，極易分化，2個月後形成小苗。外植體類型對擬原球莖的誘導有較大的影響，成熟莖段很難脫分化，幼嫩組織的誘導率相對較高，但幼莖段褐化較高，適宜做外植體是叢生幼芽。激素TDZ對擬原球莖的誘導有明顯的促進作用，但TDZ會導致苗矮化，莖細，根短而少。從正交結果分析可得，MS+BA1 mg/L+NAA0.1 mg/L+TDZ0.1 mg/L組合的培養基擬原球莖誘導率最高。擬原球莖的增殖，以1/2MS+NAA1mg/L+3％蔗糖為佳，且擬原球莖的生長需要一定的光照。高濃度的BA和低濃度的NAA組合，可加快擬原球莖的分化進程。擬原球莖分化形成小苗後，在幼苗壯苗過程中，BA和NAA有不同的作用，BA會促進植株的分蘗，而NAA利於植株生長，但濃度過高會抑制苗生長，因此壯苗期間用低濃度的NAA和IBA組合效果更好。液體培養的細莖石斛擬原球莖生長曲線大致呈“S”型，擬原球莖經過10d左右的延遲期後進入對數生長期，第50d左右達到生長高峰，此後，生長緩慢，進入靜止期。擬
原球莖中總生物鹼和多醣含量隨著擬原球莖的生長逐漸積累，在培養的第40d左右達到高峰，之後含量有所下降，這兩種有效成分的積累與生長基本同步，且這兩種有效成分的含量接近於或超過野生植株莖中的含量。固體培養的細莖石斛擬原球莖生長曲線大致也呈“ S”型，從乾重增加看，固體培養的比液體培養的生長要快，從有效成分積累比較，固體培養的適宜於多醣的積累，而液體培養的適宜於總生物鹼的積累。光照有利於擬原球莖的生長和多醣的積累，隨著光強的增加，多醣含量增加，黑暗不利於擬原球莖的生長和多醣的積累，但總生物鹼的含量比光照培養的有所增加。MJ和牻牛兒醇均會抑制擬原球莖的生長，隨著濃度的增加，這種抑製作用增強。100μmol/L~(-1)MJ可以提高擬原球莖中有效成分的積累，而不同濃度的牻牛兒醇都抑制了有效成分的積累。
霍山石斛雜交種（F_1）及其親本生長生理與藥效成分的研究
2004-06-01 論文網
http://www.lw23.com/lunwen_306836572/霍山石斛;雜交種;石斛多醣;組成分析;抗氧化
Dendrobium huoshanense;hybrid;dendrobium polysaccharides; components
analysis;anti-oxidation
霍山石斛與銅皮石斛是安徽省霍山縣主要產有的兩種石斛，前者為中藥石斛中的上品，品質較後者好，但生長量很低，而後者生長量大。為改良霍山石斛種質，前人以霍山石斛為父本，銅皮石斛為母本培育出雜交石斛（F1代）。本文通過生長、生理指標及主要有效成分含量測定對雜交石斛與其親本進行了全面比較並分析了雜交石斛的超親優勢；同時提取純化了雜交石斛及其親本的重要藥效成分石斛多醣，並進行了理化性質鑑定，紫外、紅外光譜分析，單醣組成氣相色譜分析，蛋白質含量及氨基酸組成分析；還對三種石斛多醣的體外抗氧化作用進行了初步研究。結果如下：1.霍山石斛雜交種 （雜交石斛）生長量積累表現為近銅皮石斛的特性，有效成分含量積累則表現為近霍山石斛的特性，在生長和有效成分積累方面結合了兩個親本之間的優勢，具有很大的開發利用前景。2.雜交石斛及其親本新莖的生長高峰期是5-8月，此後生長減緩；8月中旬莖粗最高，後稍有下降。在此期間雜交石斛的莖長、節數、節間長、葉數、葉面積、單株鮮重和乾重等生長指標與銅皮石斛相近，明顯高於霍山石斛。與一年莖相比，霍山石斛基本不再生長，但銅皮石斛、雜交石斛還有生長。一年與二年生雜交石斛的莖長、節數、單株鮮重和乾重均比親本有明顯的優勢；三年生雜交石斛除莖粗稍有優勢，莖長、節數、節間長、單株鮮重和乾重均不及銅皮石斛，但較霍山石斛仍有極大優勢，單株鮮重接近其5倍，單株乾重是其6.2倍。3.雜交石斛及其親本新莖生長期中葉片葉綠素含量5月較低，6月明顯增高，7月到8月初稍有降低，11月初最高。其間雜交石斛葉綠素含量一直低於霍山石斛，11月初才開始高於霍山石斛；但從8月中旬開始就極顯著高於銅皮石斛。一年生雜交石斛葉綠素含量、吸收光譜峰值處的吸光度以及光合速率均極顯著高於兩親本。4.多醣含量均為二年莖最高，三年莖下降較大；雜交石斛二年莖與三年莖多醣含量與霍山石斛接近，低於銅皮石斛。生物鹼含量在三年中均為逐年增高，雜交石斛二年莖與三年莖生物鹼含量與霍山石斛接近，極顯著高於銅皮石斛....................
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