TTCKMC 台灣蔡大川 六美生技 中草藥 組培工廠 蝴蝶蘭組培教學(From1984).全年生產 管理 瓶苗 幼苗 專門外銷!!!

中研院覽號：09T-910419
創作人：張唯勤、陳婷玉、陳健忠 本院覽號：09T-910419

葉片繁殖拖鞋蘭--技轉!!!拖鞋蘭(slipper orchids, Paphiopedilum)每株價位仍居千元或萬元不等，迄今仍無有效的無性繁殖法為高居不下之主要原因，談不上量產企業。我們已開發出用成株葉片切塊在合適培養基中，產生多量芽體，分別可發育成植株。珍貴稀有的蘭花品種往往一株就有上百萬元的身價，對一般人來說，的確是「只可遠觀，不可褻玩」。台灣以往被稱為「蘭花王國」，例如馳名國際的蝴蝶蘭、外銷日本的文心蘭以及拖鞋蘭等，為台灣賺進大把的鈔票和國際知名度，但是，現在運用生物技術，只要想辦法取得名貴蘭花的一小片葉子，便可以複製出一顆一模一樣的蘭花了。台灣蘭花花名遠播中研院植物所張唯勤博士花了5年的時間，利用生物技術開發出可以複製文心蘭和拖鞋蘭等高價位蘭花品種的技術。原來一株體態優美、花色艷麗的蘭花品種動輒上千、上萬元，未來或許只要幾十元就買得到了。蘭花是植物界最大的科之一，共有2500多個品系。從熱帶雨林到沙漠地區，都有蘭花分布的蹤跡。搖曳生姿的風采、變化多端的花形以及五彩繽紛的顏色，正是蘭花吸引眾人目光的地方。台灣地處亞熱帶，溫度、氣候、雨量都相當適合蘭花生長，目前已經有多種蘭花進行商業栽培，蝴蝶蘭、文心蘭和拖鞋蘭等，都是國際花卉市場上名聞遐邇的蘭花品種。 這些蘭花的身價不斐，從幾千元一株到上萬元，甚至上百萬元的品種都有，經營花卉進出口貿易的許明哲就指出，蘭花的許多品系，至今仍無有效的無性繁殖技術，再加上蘭花栽培的時間長、種子發芽率又低，因此，價格一直高居不下，近年來，雖有新的繁殖技術出現，但仍無法做到量產的規模。首位嘗試將組織培養的技術應用在蘭花上的法國人莫瑞爾（G. M. Morel），他的方式是取莖頂組織進行培養，再經由類原球體獲得植株。若要以組織培養的方式來繁殖植物，首先就必須取得培植體，也就是從植物上取得細胞、組織或器官，再將這些培植體放入人工培養基上，經過一段時間的培養後，再藉由傷口誘生癒傷組織。葉片組織細胞再生植株雖然目前業界已利用組織培養方法繁殖文心蘭，但仍缺少細胞再生成植株的明確方法。張唯勤則以葉片細胞直接再生成植株，以及由葉片組織所產生的癒傷組織細胞再生成植株等方法，來複製文心蘭。張唯勤表示，以細胞複製文心蘭時，須以花梗、根、莖及葉做為培植體，將這些培植體放入合適的人工培養基，一、兩個月後，癒傷組織便會從根尖、莖及葉培植體的切口部位長出。這些被誘導的癒傷組織可以培養在培養基中，形成更多的癒傷組織，且仍具有再生植株的能力。如此一來，我們便不需要每次都從培植體去誘導新的癒傷組織。獲得大量癒傷組織後，再進行體胚的誘導。理論上，每個細胞都可以產生一個體胚，所以一小塊癒傷組織便可以誘導出數十個；甚至數百個體胚。至於體胚的發生，是培養的體細胞經過一連串類似有性胚發育的過程後，而形成小植株。張唯勤指出，除了以細胞複製文心蘭外，素心蘭、蝴蝶蘭及拖鞋蘭等，都可以經由癒傷組織誘導出小植株，但未來仍需進一步以營養器官或組織來誘導癒傷組織，才能針對特定的品種進行繁殖。直接體胚發生複製文心蘭此外，張唯勤也以直接體胚發生的方式複製文心蘭，這種技術不需經由癒傷組織，便可以誘導培植體形成體胚發生，進而再生植株。他將文心蘭的葉片取下做為培植體，培養在不含植物生長調節劑的培養基中，約一個月後，葉片的尖端、上表面及切口部位，便會形成體胚，經過幾個星期後，體胚會發育成為原球體，然後抽芽長大，最後形成小植株。研究助理陳婷玉表示，以電子顯微鏡觀察體胚，可以看到大量的體胚從葉表面長出，同時除了葉子表面之外，葉子的尖端也是一個較容易形成體胚的地方。她指出，以直接體胚發生來繁殖文心蘭的速率較快，從誘導培植體形成體胚到小植株、出瓶、馴化，僅需五到六個月左右的時間。此外，經由直接體胚發生所獲得的小植株變異的機率較低，因為癒傷組織經過長期的繼代，在生長調節劑等環境的刺激下，容易導致體細胞變異，比較起來，以葉細胞直接形成體胚確實比較穩定。在合適的條件下，每個葉細胞都會形成體胚，一片葉子便可以複製出許多性狀及遺傳物質相同的小植株，而這些小植株的葉片，也可以再用來誘導體胚發生，繁殖效率便可以大大提升。由於沒有一種方式、或培養基，可以適用於複製所有的蘭花品種，因此進行蘭花繁殖時，都必須使用不同的方式。葉片切塊繁殖拖鞋蘭在複製拖鞋蘭的方法上，張唯勤進一步開發一套僅以葉片就可以繁殖拖鞋蘭的技術，也就是用成株的葉片切塊，放到適合的培養基中，以產生多量的芽體，然後，分別發育成植株。這種經特殊設計的培養基，是一種類似植物荷爾蒙的物質，包含Auxin（生長素）Cytokinin（細胞分裂素）等多種成分，可以引導植物誘變，促使植物產生變化。簡單地說，就是以植物荷爾蒙刺激，讓植物產生各種生理變化，例如抽芽、細胞增殖、分裂，決定成長的速度等。一般來說，若採用傳統的栽培方式，拖鞋蘭從第一代到繼代的出現，少說也要等上五年的時間；若以葉片的無性繁殖法，從葉子切片到長出叢生芽，再到成體，只需十個月左右的時間，不但縮短栽培的時間，還可以取得大量且性狀與母代一致的植株。以往拖鞋蘭的原生種一株高達50萬元，現在至少也要7至8萬的價位，未來只要進一步開發量產的方法、簡化量化的步驟和流程，台灣以價格低廉、品質優良的蘭花品種，進軍國際花卉市場，一定相當具有競爭力，目前已經有四家廠商表達高度的興趣，希望移轉這項技術。「未來一株拖鞋蘭賣五塊錢也不是不可以，不過，希望這項技術不會讓所有種植蘭花的花農失業！」張唯勤說。蘭花繁殖法「蘭花的繁殖，有分株、無菌發芽及組織培養等幾種方式。」張唯勤指出。所謂的分株，就是將蘭花在植珠基部所形成的側芽，切離母體，使這些側芽單獨存活。這種方法可以取得與母體（母代）性狀一致的下一代，缺點是繁殖的數量很有限，一年只能增殖一至兩倍，經濟效益不高。一般來說，蘭花種子內的胚，必須和一種細菌（蘭菌）共生後才會發芽。而無菌發芽，卻是將蘭花種子播種於滅菌過的培養基中，讓培養基中所含的糖類及營養元素取代蘭菌，幫助蘭花種子的胚繼續發芽成株。無菌發芽的方式複製蘭花，可以得到大量的種苗，但種子本身經由有性生殖而來，經過基因重組的過程，因此，無法得到與母代性狀一致的下一代，讓優良的蘭花品種繁衍至下一代。目前商業栽培的蘭花，大多以組織培養的方式繁殖，也就是取植物的細胞、組織或器官進行體外培養，以取得性狀及遺傳特性一致的植株，這種技術已經廣泛地應用在植物的繁殖及育種上。另外，也有人以芽體增殖的組織培養方式複製蘭花，例如，蝴蝶蘭便是利用花梗芽進行繁殖，不過，這種方法的繁殖效率較差，成本也較高。目前以細胞來複製蘭花仍僅限於文心蘭、素心蘭及蝴蝶蘭等，幾種品種。
張唯勤Dr. Wei-chin Chang

化學名稱

中文名稱

mg/L

備注

Ca(NO₃)₂﹒4H₂O

硝酸鈣

556

大量元素

NH₄NO₃

硝酸銨

400

KNO₃

硝酸鉀

900

MgSO₄﹒7H₂O

硫酸鎂

370

KH₂PO₄

磷酸二氫鉀

170

CaCl₂﹒2H₂O

氯化鈣

96

2492mg

MnSO₄﹒4H₂O

硫酸錳

22.5

微量元素

ZnSO₄﹒7H₂O

硫酸鋅

8.6

H₃BO₃

硼酸

6.2

CuSO₄﹒5H₂O

硫酸銅

0.25

Na₂MoO₄﹒2H₂O

鉬酸鈉

0.25

37.8mg

FeSO₄﹒7H₂O

硫酸亞鐵

27.3

鐵鹽

Na₂-EDTA

乙二胺四乙酸鹽

37.3

64.6mg合計2594mg

thiamine﹒HCl（維生素B₁）

鹽酸硫胺素VB₁

1.0

有機

pyridoxin﹒HCl（維生素B₆）

鹽酸□哆辛VB₆

0.5

nicotinic acid(Vit B₅)

煙酸VB₅

0.5

Glycine

甘氨酸

2.0

myo-inositol

肌醇

100

+BA +IAA +IBA +NAA +24-D+TDZ............

適用范圍:木本植物

牛樟與冇樟是二種形態上極為相似的樹種。本文從果實種子形態、精油組成與同功　分析等方面提供資料來彰顯二者之差異性。牛樟果實呈僧帽狀，長1.11公分，寬1.51公分，種子胚軸與果柄成一直線；冇樟果實呈長橢圓球，長1.62公分，寬1.17公分，種子胚軸常歪生。生樟木材以含松油醇為主，而冇樟則以黃樟油為主。牛樟與冇樟之同功　分析顯現酵素帶之形式(對偶因子)差異甚大區隔明顯。孝義冇樟與蓮華池冇樟是二種形態不同的冇樟，果實種子大小差異明顯，孝義冇樟果實之長與寬各為蓮華池冇樟之2倍左右，在同功　分析上GOT與MDH已顯現二生態型之間有明顯之分化。

牛樟、冇樟與樟樹為樟科樟屬內形態相近的相關種，三者在空間分布上，廣狹不同。本研究用ISSR分子標誌檢測三者之族群遺傳結構，並以NTSYS進行群團分析及主成分分析並以POPGENE及AMOVA軟體分析其族群結構及變方。樟樹為廣泛分布種，樟樹台灣地區之樟樹與大陸地區之樟樹大致形成2個群團連結，再與恆春半島地區之種源聯結，並以日本琉球地區石垣島之樟樹作為對照。變異數分析（ANOVA）。結果顯示大陸產、台灣產與日本石垣島之樟樹間變方成分為45.40％，而區域內族群間之變方成分為26.64 ％，族群內個體間的變方成分為27.96％。樟樹種內的遺傳歧異度為0.2564，就族群分化係數（Gst）來看，為0.4881，基因流轉（Nm）的數值為0.5244，基因流的數值則低於1，顯見兩岸之樟樹族群間存有交流障礙。冇樟為區域性分布種，本研究利用台灣地區之冇樟及大陸廣東地區之冇樟為材料進行分析，結果在群團分析及主成分分析上都可明顯分成2個群聚：第1群是台灣冇樟，第2群為大陸廣東地區的冇樟。在POPGENE之遺傳距離分析上廣東地區冇樟與台灣地區之冇樟相似性係數極低在0.5445至0.4316之間，兩區域間之相似性係數已低於種間的相似性係數之值。台灣地區之冇樟族群族群分化係數（Gst）為0.3021，在基因流轉（Nm）的數值為1.1548，基因流的數值高於1，顯見台灣之冇樟樹族群間不存有交流障礙。將大陸種源冇樟樹和台灣種源的冇樟當作2區域進行變異數分析（AMOVA），依據區域間、區域內族群間及族群內個體間等分析三個等級之變方成分。結果大陸產之冇樟、台灣產冇樟間變方成分為56.37%，而區域內族群間之變方成分為13.19 %，族群內個體間的變方成分為30.44%。牛樟為台灣特有種，在NTSYS軟體的群團分析及主成分分析上都可明顯分成2個群聚：1群是台灣牛樟，另1群大陸廣東地區的冇樟。在台灣牛樟族群無法區分各個族群。但台灣地區之牛樟族群的相似性係數與地理距離分布並無正相關。族群分化係數（Gst）為0.3490，基因流轉（Nm）的數值上為0.9328，基因流的數值則低於1，顯示牛樟族群間可能因近年來人為開採而導致族群減少，各族群間已有交流障礙產生。在POPGENE分析牛樟、冇樟和樟樹親緣關係，以牛樟與樟樹兩者之遺傳距離僅為0.0997來推論，印證藤田安二（1952）以精油成分分析，認為牛樟由樟樹演變而來的結果相符。cpDNA所建立的樹狀圖及距離矩陣都顯示出，本研究所使用的台灣地區之冇樟與大陸廣東地區之冇樟有著極大的差異存在。台灣地區之樟屬植物以葉綠體DNA中之2片段（PetD-PetB、TrnS-TrnT）定序結果顯示，約略可將樟屬區分成樟組及肉桂組，其分子證據與傳統之分類處理大致符合。再以葉綠體DNA中之3個片段（PetD-PetB、TrnV-TrnM、TrnS-TrnT）定序結果以及Kimura’s 2-parameter distance遺傳距離顯示，菲律賓樟（Cinnamomum philippinense）應改隸為楨楠屬，學名應為菲律賓楠「植物組織培養技術之開發應用」之主要執行內容： 1. 「牛樟根蘗苗試管繁殖及體胚分化」： 牛樟未成熟種子誘導之體胚於適當處理下，可產生次生胚，次生胚則於適當處理下可繼續產生新次生胚。 2. 「利用細胞繁殖拖鞋蘭」： * 已發表利用葉片細胞繁殖拖鞋蘭的方法. 3. 「擎天類及扇形花類觀賞鳳梨胚性細胞培養及體胚發生研究」： 擎天屬龍鳳擎天鳳梨由花瓣培植體接種於逆分化培養基，癒合組織發生率可達50- 80% ，將球狀體之癒合組織移至液態培養基振盪懸浮培養，約2個月可得均質之胚性細胞系。胚性細胞系經平板培養，以SH 半固體培養基組合N A A 及2ip可誘導胚狀體，將成熟胚狀體移至1/2SH 添加N A A 培養基中已有胚苗生成。目前亦參試扇形花類之玉扇鳳梨及金馬鸚歌鳳梨，以小花附屬器官為培植體，接種於1/2M S逆分化培養基單獨添加2,4-D 或組合BA ，經2-3個月可得胚性癒合組織。並將進一步建立胚性細胞懸浮培養體系。日本女貞其組織培養之微體繁殖體系。初步結果如下：本試驗以日本女貞之成熟種子為培植體進行培養。將成熟種子先以流水處理24小時，先以1％安其消毒液浸泡20分鐘做表面清潔，再以70％之酒精浸泡5分鐘，最後在5％ NaOCl水溶液（含約0.1％（v/v）Tween20展著劑）中超音波震盪30分鐘，種子可達100％之無污染率。在器官形成方面：種子與成熟胚植於WPM、1/2MS、MS三種基礎培養基中以WPM對於無菌苗之誘導效果最好。以胚軸為培植體，以WPM為基礎培養基在光照環境下，添加0.5 ppm 之2,4-D培養，可獲得大量淡黃色、鬆軟之癒合組織。以無菌苗之頂芽為培植體，以WPM為基礎培養基在光照環境下，可順利發根。無菌苗之頂芽，在含有0.01 ppm
IBA及1 ppm BA 之WPM培養基中，光照環境下可誘導出多芽體。誘導出之多芽體以WPM空白培養基在光度20±5μmol m-2s-1時，抽長效果較好。日本女貞細胞液態培養以0.1 ppm 2,4-D配合10 g/l 蔗糖之WPM培養基最為適當。台灣扁柏Chamaecyparis obtusa var. formosana與大葉桉Eucalyptus robusta 的芽體與懸浮培養細胞為材料，利用玻璃質化法進行超低溫保存之研究，並檢測PVS2的毒性、LN(loading solution)試驗及不同濃度的PVS2處理，以找出最佳的配方與處理方式，提高冰凍後細胞之活力。大葉桉以MS培養基添加0.5ppm BA與1ppm NAA誘導多芽體，單一芽體平均產生10個芽，並以5ppm 2,4-D誘導癒合組織得到最佳結果；台灣扁柏以WPM培養基添加0.5-1 ppm BA時多芽體誘導率最高，以NAA 5ppm誘導癒合組織得到最佳結果。將大葉桉懸浮細胞浸置PVS2溶液15分鐘以上會使活性降低至35％以下，但台灣扁柏懸浮細胞浸置30分鐘以上卻依然有60％以上的細胞活力；LN(loading solution)試驗則可降低PVS2對其懸浮細胞的毒性使細胞活性經PVS2處理15分鐘後仍維持將近60％的活性。先以50％PVS2處理大葉桉懸浮細胞5分鐘，再以100％PVS2處理10分鐘，細胞活力可以高達68％，並能誘導出癒合組織生長，而芽體經50％PVS2處理60分鐘再以100％PVS2處理60分鐘，可使細胞活力高達82％。而臺灣扁柏多芽體先以50％PVS2處理，再以100％PVS2處理60分鐘，細胞活力可以高達76％，並有33％的芽體能誘導出癒合組織。毛柿成熟胚培養於MS培養基可促使胚發芽，外加生長節劑則會抑制發芽作用。成熟胚培養於添加0.1及0.5 ppm 2,4-D之MS培養基，胚軸具膨脹反應，將膨脹之胚軸繼代培養於添加0.3%（w/v）活性炭之MS培養基，可誘導直接體胚與間接體胚發生。毛柿成熟胚之胚軸培養於添加0.1 ppm 2,4-D及0.2％（w/v）PVP之MS培養基可誘導直接體胚發生，培養於添加活性炭之MS培養基則無反應。0.1 ppm TDZ與0.1 ppm 2,4-D之組合較單獨使用2,4-D可獲得較高之體胚發生率，BA與2,4-D之組合較單獨使用2,4-D並無顯著效果。毛柿體胚發生需培養於光照環境，黑暗環境雖亦有體胚發生現象，但效果較培養於光照環境差。誘導體胚發生所需之蔗糖濃度為3%（w/v）或4%（w/v），蔗糖濃度過低或過高皆不利毛柿體胚發生。毛柿成熟胚之胚軸培養於修飾過之MS培養基，以KNO3濃度為28.2 mM及NH4NO3濃度為10.3 mM，NO3-/NH4+比值為3.7，可得最佳體胚誘發效果，將發展至球形階段之體胚培養於分化用之空白培養基，MS培養基氮濃度減半具促進體胚發芽之作用，維持原氮濃度，體胚可發芽、發根及胚軸伸長，提高氮濃度至原MS培養基之3/2倍，可促進體胚胚軸伸長。喜樹（Camptotheca acuminate Decaisne）富含camptothecin與10-Hydroxycamptothecin等生物鹼成分。以胚為培殖體誘導癒合組織結果顯示：胚在MS基礎培養基中添加IBA 0.5mg/l與BA 4mg/l、 Picloram 0.5mg/l與Kinetin 4mg/l、NAA 4mg/l與BA 2mg/l及單獨添加NAA 1mg/l之處理下，可以得到較佳的癒合組織生長，其中以NAA 4mg/l與BA 2mg/l組合所誘導出癒合組織較為鬆軟且生長快速，可作為懸浮培養試驗的材料。在多芽體誘導方面，以MS基礎培養基添加IBA 0.5 mg/l與BA 0.5mg/l的誘導效果最佳。根的誘導則以MS基礎培養基添加IBA 2 mg/l效果最佳。利用喜樹癒合組織細胞建立懸浮培養系統，選擇salicylic acid、chitin、jasmonic acid、methyl jasmonate等四種誘發劑，來探討其10-hydroxycamptothecin生產的影響。添加100μM salicylic acid於MS液態培養基中，經7天培養後10-Hydroxycamptothecin產量887.5μg/g。而加入chitin懸浮3ml/25ml至MS液態培養基中時，10-Hydroxycamptothecin含量可達2502.7μg/g效果較佳。另外jasmonic acid濃度為100μM10-Hydroxycamptothecin之含量可達10246μg/g，為四種誘發劑當中效果最為顯著。而當methyl jasmonate濃度為200μM時，10-Hydroxycamptothecin之含量可達3836.6μg/g。青剛櫟（Cyclobalanopsis glauca）未成熟胚之培植體為材料。將未成熟種子去除其基部的殼斗後，先以稀釋500倍的安期消毒劑清洗10分鐘，再以70％酒精浸泡5分鐘，最後以5％ NaOCl水溶液（含約1％（v/v）Tween20展著劑）為消毒劑，在超音波震盪15分鐘，剖開種子取未成熟胚進行無菌培養，在黑暗的培養環境下，癒合組織誘導率較高，平均為91.17 ﹪，其中以植物生長調節劑濃度為1 mg/l的2,4-D誘導率最高，達到94.52 ﹪。在黑暗中培養40天之癒合組織，其重量平均增加8.79倍，其中又以0.5 mg/l之2,4-D處理較高，增加17.97倍。在36個試驗細胞株樣品中，5種預定目標成分中僅檢測出(+)-catechin 和(-)-epicatechin 2種成分，(+)-gallocatechin、(-)-epigallocatchin及rutin則沒有發現。每1公克新鮮癒合組織細胞內平均含有186.21μg之(+)-catechin及54.28μg之(-)-epicatechin 紅檜未成熟胚播種在WPM（Woody plant medium）修正培養基添加3mg/l
2,4-D及0.5mg/l BA，在黑暗中培養。經過1個月後，誘導到黃白色、濕軟之癒合組織進行懸浮細胞培養，經過生長曲線測試及光學顯微鏡觀察後取得生長最旺盛及具有體胚分化能力之細胞1g放入含WPM修正培養液50ml之250ml 三角錐形瓶放大培養，接著取 20 g之懸浮培養細胞，移入2L攪拌通氣式之生物反應器，內含1.2L WPM 修正培養液+ABA之培養液。培養中持續通氣及攪拌，經過2個月後可得到心型、魚雷型期體胚，再將體胚置入固體培養基促使其成熟 。以誘導出臺灣扁柏芽體、紅檜體胚為材料，將其與3 % Sodium
alginate放入漏斗中均勻攪拌，使其滴落於 25mM CaCl2.2H2O中，1分鐘之內可製造出130顆以上之人工種苗，其中約有60顆為成功之人工種苗，另有一半為空粒。將其播種在無菌培養基中，具有72.6％發芽率及59.2％的發根率。以臺灣扁柏莖頂、芽體為材料，市售之藥用褐色透明膠囊製作膠囊型人工種子，其發芽率為53.6 %，發根率達25.6%。臺灣鐵杉（Tsuga chinensis (Franchet) Pritz. ex Diels
var. formosana (Hayata) Li ＆
Keng）之成熟胚為培植體進行培養。將成熟種子先以流水處理48小時，再以70%酒精浸泡兩分鐘，最後在5% NaOCl水溶液（含約1% (v/v) Tween20展著劑）中超音波震盪20分鐘，可達零污染率。取成熟胚進行培養，在添加0.1% (v/v)
EM-X溶液之培養基培養可大幅提高發芽率。以MS為基礎培養基在黑暗的環境下，添加1ppm BA及2ppm 2,4-D培養，可獲得大量淡褐色、鬆軟之癒合組織。以MS培養基在光照環境下，添加0.1ppm TDZ培養可促進幼苗生長。以SH培養基培養，無論添加BA、TDZ或BA與2,4-D之組合，皆可獲得不定芽。在黑暗的環境下，BA與2,4-D則可誘導出白色堅硬的癒合組織。將具不定芽之培植體移往不含生長調節劑1/2 SH培養基，以含活性炭與不含活性炭的培養基交互培養，可得小植株。青剛櫟 (Cyclobalanopsis glauca Thunb) 之未成熟胚為培植體，置入含1 ppm NAA 與0.5 ppm BA的MS培養基中，可誘導出無菌苗。分別以未成熟胚及無菌苗之胚軸、子葉為培植體誘導癒合組織結果： 未成熟胚、胚軸在MS添加1ppm 之NAA，子葉在MS添加0.5 ppm2,4-D效果最佳，而三種培植體中，以未成熟胚誘導出的癒合組織最多。當植物生長調節劑不同，誘導出的癒合組織形態也不同，其中以2,4-D誘導出胚性癒合組織，可作為懸浮培養的材料。另以未成熟胚、胚軸、子葉進行體胚的誘導，結果：以胚軸及子葉誘導出的體胚數量不多，且部份會形成癒合組織，未成熟胚進行體 胚誘導效果最佳。在直接體胚誘導上，最適合青剛櫟的auxin與cytokinin的組合為使用0.5 ppm NAA 與0.5 ppm TDZ，其誘導的體胚質與量均佳。促進體胚成熟時，加入0.5或1 ppm ABA，可使體胚正常發育台灣雲杉(Picea morrisonicola Hayata)成熟胚為培植體進行培養。將成熟種子經48小時流水處理，以70%酒精浸泡2分鐘及浸在4% NaOCl水溶液(含約1%(v/v) Tween 20展著劑）中超音波震盪10分鐘，污染率為零。取成熟胚進行胚培養，於每一個50 ml三角錐形瓶中的20 ml固體培養基上放置10個胚。在全光照及黑暗的環境中培養，產生癒合組織的不同：全光照下誘導出綠色、緊實之癒合組織，在黑暗下則為黃色、鬆軟之癒合組織。將黃色、鬆軟癒合組織培養於添加2ppm 2,4-D、1 ppm BA的MS培養基中，在黑暗環境下經過四個月，可誘導出白色黏質的胚原性癒合組織，其含有具胚性端及胚柄細胞的前子葉期體胚；最後將胚原性癒合組織移至添加0.1ppm2,4-D、1ppm BA與2 ppm ABA的MS固態培養基中，經過兩個月全光照的培養，則可誘導出綠色短軸之子葉期體胚。臺灣肖楠(Calocedrus formosana (Florin)Florin)、臺灣穗花杉(Amentotaxus formosana Li.)與臺灣紅豆杉(Taxus mairei)三種樹種其組織培養之微體繁殖體系。初步結果如下：臺灣肖楠表面消毒試驗之結果，種子可達90%之無污染率，未成熟胚則可達零污染，4-6個月實生苗莖段可控制在92.5%無污染率，2-3年生實生苗莖段控制污染僅能達到57.5%之無污染率，且培植體於消毒後都褐化死亡。在器官形成方面：成熟胚培植於WPM、MS、B5三種基礎培養基對無菌苗之誘導效果最好。未成熟胚培養於添加600mg/l casein hydrolsate、500mg/l yeast
extract、0.5ppmBA及1ppmNAA之WPM培養基中，可誘導出多芽體。無菌苗帶節莖段在添加0.05ppmNAA與0.5ppmBA之WPM培養基中可誘得最多腋芽之發生。4-6個月實生苗針狀葉帶節莖段在含有0.05ppm NAA及1ppmBA之處理可誘導腋芽之發生，鱗狀葉培養於1ppmBA與0.05ppm NAA之WPM培養基中可誘導形成腋芽，但芽體叢生狀並玻璃質化，而在含有0.01ppmTDZ與0.05ppmBA之處理可獲得60%之不定芽誘導率。癒合組織在含有1ppmNAA及0.1ppmBA

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北蟲草是具有較高滋補和藥用價值的真菌
(大陸的方法!!)
1.培養基配方：大米1公斤，蟲草專用防污劑35克，水1.5公斤。   2.配製方法：大米按每袋50克或100克分裝入塑料袋。將1.5升50℃的熱水倒入乾淨盆內，將蟲草專用防污劑放入熱水中，攪至完全溶解即成營養液。按料水比（即大米與營養液的用量比）1克∶1.5毫升稱取營養液倒入裝好大米的塑料袋內。分裝完後用塑料繩將每個塑料袋中部和口部各扎1道。3.滅菌：滅菌鍋內加適量水，把培養料袋放入滅菌鍋，升溫至100℃，保持1小時。取出，冷卻後移入接種室。用優質氣霧消毒劑或常規方法密閉消毒30分鐘，即可穿戴消毒衣服進入接種室接種。4.接種：進入接種室應迅速關好門（防止含有雜菌的空氣進入）。接種工具、菌種外壁、操作人員雙手等，用75%酒精擦拭或浸沾消毒。現介紹易推廣的用固體大米菌種接種的方法：①試管原種的轉擴栽培：拔去試管塞後用消毒的接種鉤挖取豆粒大小的菌種2～3塊，接入培養基面上，稍紮緊袋口即可。②用原種轉擴栽培袋時，先將菌種搗成指頭或豆粒大小塊狀，每袋接入5～10剋菌種，均勻分佈在料面上。如條件允許可適當增加接種量，以利菌絲較快生長。接種完後按原扎口方法稍紮緊袋口，即可移入經殺菌和防蟲處理的培養室內培養。5.培養：北蟲草屬中低溫菌類，菌絲生長溫度範圍為5～30℃，菌絲最適生長溫度為15～25℃，子座最適生長溫度為18～22℃。最初將溫度保持15～18℃遮光培養。當菌絲生長至培養基1/2～2/3時，可將溫度升至20℃，20天菌絲可發滿袋。幾天后，當培養基上部出現菌絲突起時，給予10～15℃的溫差刺激，並增加光照刺激轉色。7～10天轉完色後對培養室消毒30分鐘，然後解去培養料袋中部扎繩，用手把袋折成直筒狀，為子座生長提供空間。當子座長至1厘米，及時對栽培袋通氣，溫度保持18～22℃，空氣相對濕度80%～90%。6.採收：子座呈橘紅色或橘黃色棒狀不再生長時，打開袋口用小刀或剪刀將其從基部採下，放入潔淨器具內及時烘乾或晾乾，勿暴晒以免褪色。乾燥後存放在密閉塑料袋內或出售。人工種植北冬蟲夏草:幫泰冬蟲夏草北京金松冬蟲夏草人工種植黃金草官網人工種植黃金草官網產品天然、人工種植黃金草官網健康迎合現代消費隨著經濟社會的持續發展，人工種植黃金草官網全球人民生活水平和保健意識日益提高，人工種植黃金草官網人們開始注重天然保健品，但是奇缺昂貴的野生冬蟲夏草已遠遠不能滿足人們的需求。人工種植黃金草官網日益增長的冬蟲夏草市場需求，孕育出人工培育黃金草（北冬蟲夏草）巨大的發展空間，有力的助推了黃金草（北冬蟲夏草）的開發利用。據悉，北京金鬆生物營銷中心是國內為數不多開展人工蟲草種植的企業之一，其旗下產品“天地神草”專家稱，“天地神草”模擬野生蟲草生長規律栽培而出，且據最新研究表明其營養價值與野生蟲草極為相似，產量高、週期短............
北蟲草又稱蛹蟲草，屬子囊菌類的麥角菌目、麥角菌科。 近年來野生資源日漸匱乏，而人工栽培的北蟲草以良好的醫療保健功效深受消費者歡迎。 筆者經多年試驗，研究出了簡便、不易污染、投資少、以大米為主要原料、用塑料袋栽培北蟲草的新技術。一、原材料要求 1、選用菌絲潔白、適應性強、見光後轉色、出草快、性狀穩定的速生高產優質菌種，是栽培成功和高效的關鍵。 初學者應選購菌種量多的固體原種，有栽培經驗者可購買斜面試管種或液體菌種。2、選用新鮮無霉變、無污染的大米或碎玉米。 3、選用厚度0.05毫米以上，規格為15厘米×30厘米或17厘米×3​​0厘米，薄厚均勻、無破漏、韌性強的優質聚丙烯塑料袋為栽培容器。 4、為防治污染損失，可選用集營養、防污、助長功效於一體的蟲草專用防污劑，如食用菌專用特效防污劑。 二、栽培方法 1、培養基配方：大米1千克，蟲草專用防污劑35克，水1.5千克。 2、配製方法：大米按每袋50克或100克分裝入塑料袋。 將1.5升50℃的熱水倒入乾淨盆內，將蟲草專用防污劑放入熱水中，攪至完全溶解即成營養液。 按料水比（即大米與營養液的用量比）1克:1.5毫升稱取營養液倒入裝好大米的塑料袋內。 分裝完後用塑料繩將每個塑料袋中部和口部各扎一道。3、滅菌：滅菌鍋內加適量水，把培養料袋放入滅菌鍋，升溫至100℃，保持1小時。 取出，冷卻後移入接種室。 用優質氣霧消毒劑或常規方法密閉消毒30分鐘，即可穿戴消毒衣服進入接種室接種。4、接種：進入接種室應迅速關好門（防止含有雜菌的空氣進入）。 接種工具、菌種外壁、操作人員雙手等，用75%酒精擦拭或浸沾消毒。 現介紹易推廣的用固體大米菌種接種的方法：①試管原種的轉擴栽培：拔去試管塞後用消毒的接種鉤挖取豆粒大小的菌種2-3塊，接入培養基面上，稍紮緊袋口即可。 ②用原種轉擴栽培袋時，先將菌種搗成指頭或豆粒大小塊狀，每袋接入5-10剋菌種，均勻分佈在料面上。 如條件允許可適當增加接種量，以利菌絲較快生長。 接種完後按原扎口方法稍紮緊袋口，即可移入經殺菌和防蟲處理的培養室內培養。5、培養：北蟲草屬中低溫菌類，菌絲生長溫度範圍為5-30℃，菌絲最適生長溫度為15-25℃，子座最適生長溫度為18-22℃。 最初將溫度保持15-18℃遮光培養。 當菌絲生長至培養基1/2-2/3時，可將溫度升至20℃，20天菌絲可發滿袋。 幾天后，當培養基上部出現菌絲突起時，給予10-15℃的溫差刺激，並增加光照刺激轉色。 7-10天轉完色後對培養室消毒30分鐘，然後解去培養料袋中部扎繩，用手把袋折成直筒狀，為子座生長提供空間。 當子座長至1厘米，及時對栽培袋通氣，溫度保持18-22℃，空氣相對濕度80-90%。6、採收：子座呈橘紅色或橘黃色棒狀不再生長時，打開袋口用小刀或剪刀將其從基部採下，放入潔淨器具內及時烘乾或晾乾，勿暴晒以免褪色。 乾燥後存放在密閉塑料袋內或出售.............................

 
山竹（學名：Garcinia mangostana），又名莽吉柿、山竺、山竹子、倒捻子、鳳果，熱帶常綠喬木，原產於馬來群島中的巽他群島和摩鹿加群島，由於盛產於南洋熱帶地區，有「熱帶果后」之稱。在馬來西亞、新加坡和泰國，榴槤和山竹被視為「夫妻果」，故此相對於稱為「果王」的榴槤而言，山竹就是「果后」。山竹同屬的主要水果包括鈕扣山竹（Garcinia prainiana）和檸檬山竹（Garcinia madruno），近緣種是福木（Garcinia
subelliptica）。山竹樹可長到7－25米高，樹冠為圓形或圓錐形，樹皮為黑褐色，樹皮汁液為黃色，至少需要5－6年才可結果，而大多數則需要8－10年。樹葉對生，長8－15厘米，為常綠厚葉，光澤皮革質感。花直徑2.5－5厘米，雄花或兩性花，兩性花生於嫩短枝的前端，1或2個。萼片及花瓣4枚，為肉質黃色雜有紅色和淡粉色。一朵花中雄蕊數量多，雌蕊一個，柱頭4－8裂。山竹果實成熟後，果實為直徑4－8厘米的球形，表面光滑，肉質萼片及外果皮內層的柱頭殘存，果皮很厚且極為堅硬，需用刀才能切開。其果皮為黑紫色或粉紅色，很厚，味苦，一般不食用；果肉為白色，瓣狀，外觀頗似蒜瓣，可食用，味道濃郁，清涼甜美，口感柔和，有質感；但也有人說像大鼻涕一樣。山竹需要生長在4 °C以上的環境中，否則植株無法成活。近觀山竹進行不完全無配生殖，因此不需要受精即可長出果實。剛長出的果實為嫩綠色，如果在樹下生長的話，果實會完全是白色。在接下來的兩三個月裡，果實體積變大，外果皮顏色逐漸變深，最後變為深綠色。最終整個果實會長到直徑約4－8厘米為止，而且堅硬的外果皮會變得軟些，這是其種子已發育完全。當果實體積停止增大後，葉綠素合成減緩，另一色相開始顯現。最初果實的外果皮色素為綠色，上有紅色條紋，接著整體變為紅色，最後變為暗紫色，此過程持續十多天，標誌著果實完全成熟並可以食用。山竹的外果皮中包含具有收斂作用的一系列多酚類物質，包括氧雜蒽酮和單寧酸，這些物質可以確保果實在未成熟時不受昆蟲、真菌、植物病毒、細菌和動物的侵害。[1]最新醫學報導指出, 山竹果淬取物中某一種成分, 可以抑制癌細胞的生存, 在接觸的24小時之後就會開始產生變化,
七天後癌細胞消失, 而正常細胞對此則毫無影響!!(發表醫師:何志堃,北榮退休醫師; 資料來源:東森新聞 [2])山竹可食用的內果皮在植物學中被稱為假種皮，為白色，直徑約為4－6厘米，由4－8瓣組成，為楔形，其中包含無融合生殖種子。在外果皮的內層存在一些突起的脊，是柱頭殘留的痕迹，呈輪狀排列，與假種皮的瓣數相符。種子山竹的種子長約1厘米，扁平狀，屬於頑拗型種子，因此在發芽之前要保持種子的濕潤。其種子的胚為珠心胚，不需要經過受精。山竹的種子一脫離果實就可以發芽，而在乾燥條件下會迅速死亡。一個山竹果實中有多個種子，而其中只有一個可以萌發。山竹吃起來很甜美，但其散發出的氣味很淡，因為其氣味的化學組分量約是芳香水果氣味的1/400。[3]山竹的清香氣味主要由揮發性成分，包括乙酸己酯、葉醇（順-3-己烯醇）以及α-古巴烯（Copaene）組成。