HPLC有等強度(isocratic)和梯度(gradient)洗脫兩種方式。等度洗脫是在同一分析週期內流動相組成保持恆定，適合於組分數目較少，性質差別不大的樣品。梯度洗脫是在一個分析週期內程式控制流動相的組成，如溶劑的極性、離子強度和pH值等，用於分析組分數目多、性質差異較大的複雜樣品。採用梯度洗脫可以縮短分析時間，提高分離度，改善峰形，提高檢測靈敏度，但是常常引起基線漂移和降低重現性。梯度洗脫有兩種實現方式：低壓梯度（外梯度）和高壓梯度（內梯度）。http://bbs.foodmate.net/thread-57766-1-1.html*gradient指梯度。低壓梯度指溶劑先混合再進高壓泵，高壓梯度是指將溶劑輸進泵後再混合。梯度洗脫的含義及特點梯度洗脫又稱為梯度淋洗或程式洗提，在液相色譜中流動相由幾種不同極性的溶劑組成，通過改變流動相中各溶劑組成的比例改變流動相的極性，使樣品中的所有組分可在最短時間內實現最佳分離。優點是單位時間的分離能力增加；檢測靈敏度提高；使樣品與溶劑前沿基線分離，降低基質干擾。梯度的洗脫方式常見的雙元（或更多元）梯度洗脫具備高壓梯度和低壓梯度兩種方式，前者利用雙泵流速控制流動相溶劑的比例，準確率高且穩定，梯度延遲比較小，但通常由於購置時未配置脫氣機，可能還會殘留一些氣泡，另外由於購置經費的限制，一般配置到兩元，更多元數的購置成本就過高了；後者採用單泵方式，利用分流閥控制流動相比例，混合後再進行線上脫氣，所以一般能消除氣泡，另外通常可配置為4元，但相比高壓梯度的缺點是：準確率低而且死體積比較大，梯度延遲比較嚴重。梯度洗脫的可變參數梯度曲線如圖中所示6號曲線稱為等梯度，2、3、4、5號曲線為凸形曲線，7、8、9、10號曲線為凹形曲線，它們被稱為非線性梯度。在有機相和水相固定的前提下，水相的強度不應太弱，有機相的強度不應太強，通過改變梯度的陡度及形狀，可以對多組分的化合物進行有效地分離。梯度曲線下的面積越大，洗脫能力越強。梯度洗脫步驟的建立及應用為了使樣品的混合組分有效的分離，掩蓋住雜質峰的干擾，一個合理的梯度洗脫方法建立是十分關鍵的。首先確定好水相和有機相以及色譜柱，先採用等度的洗脫方式（即採用6號線）試驗，看是否能達到理想的分離效果，如不理想則需要使用梯度洗脫方式。如果譜圖上接近 t0 處顯現譜帶擠在一起，則需要降低初始水相的強度；若譜帶遠離色譜圖的開始部分，則應增大水相的強度。如果需要洗脫很長時間，則應增加有機相的強度；反之所有的譜帶都在比較靠前的位置被洗脫，則應降低其強度。如有必要可以調節斜率，為增大靈敏度可以增加斜率，為增大分離度可降低斜率。解決具體問題，比如溶劑分層，沒有有效的弱溶劑時，可以用梯度延遲來解決譜圖前部分離度不佳的問題。通過選擇梯度曲線凸線或凹線形式，來達到理想的分離效果。當譜圖中譜帶聚集到一起要使它們分開時採用凹線(即7、8、9、10號線)；當遇到譜帶分離太散時考慮採用凸線(即2、3、4、5號線)來縮短分離時間。同時還要考慮到梯度平衡時間以及有機污染物對梯度洗脫的影響。接下來，李鵬飛老師例舉了一個含有9個烷基苯酮化合物梯度方法的開發實例。利用上述的梯度洗脫方法的建立步驟，最終達到了理想的分離效果。最後，李鵬飛老師簡單地介紹了液相色譜分析中各種梯度洗脫方式是如何實現的。
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